**筛选三步法：高效分析**筛选测定

**筛选三步法：高效分析**筛选测定

**筛选是确定**效用必不可少的一步，要知道****或抗体**偶联物筛选测定是确立**候选物在杀死癌细胞中的效用的**步。然而，整个过程的**筛选测定是耗时和繁琐的。这篇文章的目的是使体外筛选测定更容易。

简单来说，**筛选可被分解为3步。

**步：细胞培养（plate 1）

. 仔细选择目标细胞，来测试化合物的功效。通常，选择癌细胞系（组织特异性肿瘤类，耐药/敏感性癌症）用于**筛选。

. 使用96孔板，覆盖广泛的浓度范围。

. 在200μl培养基/孔中保持铺板密度为5000-20,000个细胞。密度将取决于细胞生长和孵育时间（24,48或72小时）。准备大量的细胞稀释液。

. 一个96孔板可以测定两类**（**1：行A-D，列2-12；**2：行E-H，列2-12）中的两种**的测试。阴性对照（A-D行，第1列），阳性对照（E-H行，第1列）对照。如图1所示。

. 使用**刺激前，孵育过夜。

图1：plate 1 分布图（来自Arpita Kulshrestha）

**步：**稀释 (plate 2)

. 这一步需要计算。你需要决定化合物的测试范围。这通常基于与化合物的**效率/毒性范围相关的先前报道。如果你是**个测试者，简单地测试3个浓度范围（如100μM，10μM和1μM）。

. 一旦你知道原始浓度范围，决定目标细胞能承受的*高浓度。将该浓度乘以2，即是工作浓度（例如，如果10μM是实验的*高浓度，10X2 = 20μM是工作浓度）。 如图2所示。

. 在96孔板中，从该工作浓度起进行2倍连续稀释。多通道移液器是这一步的必备神器！

图2：plate 2 分布图（来自Arpita Kulshrestha）

第三步：**与细胞融合

. 弃掉Plate 1的整个培养基。使用多通道移液枪，将95ul新鲜培养基转移到Plate 1的每个孔中。然后，将95ul上述**稀释物从Plate 2转移到Plate 1相同（对应）的孔中。这时的阴性对照为：A1，B1，C1，D1；阳性（无**）对照为：E1，F1，G1，H1。孵育细胞。

. 一旦孵育完成，使用任何细胞活力/细胞毒性分析来测试候选**。