在ELISA试验中如何正确进行温育
在ELISA中一般有两次抗原抗体反响，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反响的完结需要有必定的温度和时刻，这一保温进程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。 温育时刻的考究： ELISA属固相**测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发作。以抗体包被的夹心法为例，参加板孔中的标本，其间的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的时机，只需*靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体触摸。这是一个逐渐平衡的进程，因而需经扩散才能达到反响的结尾。在这以后参加的酶符号抗体与固相抗原的结合也相同如此。这就是为什么ELISA反响总是需要必定时刻的温育。 温育温度的考究： 温育常选用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是试验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度。在树立ELISA方法作反响动力学研讨时，试验表明，两次抗原抗体反响一般在37℃经1-2小时，产品的生成可达高峰。为加速反响，可进步反响的温度，有些试验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为完全，在放射**测定中多使反响在冰箱中过夜，以形成*多的沉积。但因所需时刻太长，在ELISA中一般不予选用。 温育保温的考究： 保温的方法除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此刻可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性杰出的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，*后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时分更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育，反响板均不宜叠放，以确保各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反响，操作时的室温应严厉约束在规则的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求操控温育。室温温育时，ELISA板只需平置于操作台上即可。