如何检测细胞活力
在细胞培养的过程中会有一些因各种原因而死亡的细胞,活细胞所占总细胞的比例叫做细胞活力,细胞的活力能够更好的体现细胞的状态。
在组织中分离细胞时,为了了解分离的过程对细胞是否有损伤,一般都会对细胞进行活力检查。在细胞复苏的过程中为了更好的判断冻存和复苏的效果,一般会通过细胞活力检查的方式进行判断。
细胞悬液制备后,常用活体染料台盼蓝对细胞染色,进行细胞计数。
那么台盼蓝是如何进行细胞计数的呢?
当正常细细胞膜完整时,台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色。当丧失活性或细胞膜不完整的细胞胞膜通透性增加,台盼蓝能进入细胞内而使细胞着色(蓝色)。
正确操作步骤:
1. 配制4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100mL,用滤纸过滤,4℃保存。使用时用PBS稀释至0.4%。
2. 胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释(106 cells/mL)。
3. 取少量细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合,轻轻吹打混匀,染色2~3min。
4. 显微镜下观察,死细胞着浅蓝色并膨大,无光泽;活细胞保持正常形态,无色透明有光泽。若需计算活细胞率则将染色的细胞悬液滴入细胞计数板计数。
计算公式:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%
注意事项:台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数的准确性。