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原代细胞培养实验常规步骤
原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。原代细胞培养实验室常规步骤为:
1)将动物组织从机体中取出并**除去存留在组织上的**、病毒、**等污染源,这些污染源将会所需培养的原代细胞凋亡、停止生长和繁殖直至死亡,因此整个原代细胞培养过程中**在无菌状态下进行。
2)将组织块在选定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分钟,通常在37C水浴里进行,而蛋白酶的选定取决于器官组织和所需细胞的类型,比如成骨、肌肉、心、肝等就需要用胰蛋白酶才能分解而出单个细胞,但是对于脑组织和乳腺等软组织,就只能用分解能力较弱的胶原蛋白酶, 以免损伤分散出来的单个细胞。
3)将分散而成的单个细胞置于合适的培养基(含有特殊细胞生长因子、添加剂以及血清, 或者无血清培养基)中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖, 整个过程都是在无菌情况下操作。
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