丽春红染液配制及注意事项
丽春红(Ponceau S)也称猩红,带负电荷,可以与带正电荷的氨基酸残基结合,同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合,从而形成红色的条带。丽春红可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纤维素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的检测。
丽春红染色液的配制
常用的丽春红染色液有两种:一种用乙酸配制,另外一种用三***(TVA)和5-磺基水杨酸(5-Sulfosalicylic acid)配制。配制方法如下:
一、用乙酸配制成分:0.1%(w/v)丽春红,5%(v/v)乙酸,ddH2O。
4 ℃保存,不要冻上。也可以配成“0.2%(w/v)丽春红,3%(v/v)乙酸,ddH2O”。
用三***和5-磺基水杨酸成分:2% (w/v)丽春红,30%的三***,30%的5-磺基水杨酸
丽春红染色液使用说明
将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中,摇动5-10分钟或更长时间;取出印迹膜,用蒸馏水,PBS或其它适当溶液漂洗2-3次,可出现清晰条带,记录结果;用蒸馏水,PBS或其它适当溶液漂洗2-3次,每次3-5分钟,去除丽春红,进行后续的WB检测。
补充:丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶,不过,在染色之前*好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶,起到固定蛋白的作用。
丽春红染色液注意事项:
丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。
为了您的**和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。