DNA提取 ：一、pcDNA5/FRT/V5-His/CAT实验原理
DNA是遗传信息的载体，是*重要的生物信息分子，因此DNA的提取也是分子生物学实验技术中*重要、*基本的操作之一。我公司提供从各种不同来源的样品（如**、**、血液、培养细胞、动物组织及植物组织等）中提取高纯度基因组DNA的服务。
二、实验步骤
1、细胞裂解
● CTAB法 CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基**基溴化铵）是一种阳离子去污剂，可融解细胞膜，并与核酸形成符合物。该复合物在高盐溶液中（>0.7M NaCl）是可溶的，pcDNA5/FRT/V5-His/CAT通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。此法多用于植物组织、**等材料。
● SDS法 SDS是一种阴离子去污剂，高温（55℃-65℃）下可裂解细胞，使蛋白变性、染色体解析。常用于血液、**、酵母、动物组织、细胞等样品基因组DNA的提取。
● 其他方法 物理方法如机械剪切、超声波破碎、匀浆等，化学方法如异硫氰酸胍、碱裂解、蛋白酶K消化等。
2、DNA分离纯化
● 用酚/氯仿抽提裂解液，收集水相，乙醇沉淀DNA，*后用TE溶解DNA沉淀。
3、DNA的定量及检测
● pcDNA5/FRT/V5-His/CAT琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的分子质量。
● 紫外分光光度计检测DNA浓度 DNA在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50ug/ml双链DNA。提取的基因组DNA样品浓度＝OD260×50ug/ml×稀释倍数。
● 紫外分光光度计检测DNA纯度
一般用OD260/OD280值检测DNA样品的纯度。OD260/OD280值约为1.7-1.9，说明DNA纯度较好；若小于1.7有可能有蛋白污染；若大于2.0，说明有RNA污染或DNA已经降解。
三、pcDNA5/FRT/V5-His/CAT样品处理
因细胞结构及所含成分不同，样品预处理的方法也有差异。不同样品的预处理方法大致如下：
● 植物组织——液氮研磨
● 动物组织——匀浆、液氮研磨
● 培养细胞——蛋白酶K消化
● 细 菌——溶菌酶消化
● 酵 母——Lyticase消化、玻璃珠破碎
pcDNA5/FRT/V5-His/CAT注意：客户*好提供新鲜的样品或取样后立即在低温（-20℃或-70℃）冷冻保存的样品，避免反复冻溶。