首页 >>> 产品目录 >>> 分子生物学 >>> 质粒(载体)
仪表展览网 >>> 展馆展区 >>> 试剂 >>> **试剂 >>> pCANTAB-5E(非空载)
> pCANTAB-5E(非空载)

产品资料

pCANTAB-5E(非空载)

pCANTAB-5E(非空载)
  • 如果您对该产品感兴趣的话,可以
  • 产品名称:pCANTAB-5E(非空载)
  • 产品型号:
  • 产品展商:XYbscience
  • 产品文档:无相关文档
简单介绍
pCANTAB-5E(非空载)是用于抗体基因表达,制备重组抗体。宿主菌 TG1 为质粒载体pCANTAB5e 复制和表达的宿主菌,无抗性,用 2×YT 培养基,37℃进行培养。载体 pCANTAB5e 为用于构建重组单链抗体 scFv 的载体,具有氨苄抗性,大小为4522bp,具体图谱及酶切位点如下示。辅助噬菌体 M13K07 用于拯救噬菌粒,具有卡那抗性,在其辅助下噬菌粒得以复制,并以融合的形式表达在噬菌体表面。pCANTAB-5E(非空载)在 scFv 基因后面含有一段编码 Tag 尾肽(E-Tag)的序列,在尾肽后面有一琥珀(Amber)终止密码子,位于 scFv 基因与 cpIII 基因之间,在抑制型** TG1 中,这种琥珀密码子只有 20%有效,故在蛋白翻译过程中可以通读而形成 scFv-cpIII融合蛋白;
产品描述
 

pCANTAB-5E(非空载)

  • 产品信息
  • 基本信息
  • 质粒简介
  • 质粒图谱
  • 质粒序列

产品信息

产品货号 产品名称 产品规格 优惠价
XY1099 pCANTAB-5E(非空载)

20μl

¥请加QQ询价

使用说明

信裕质粒平台的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证,如存在质量问题,请在收到产品的三个月内通知我司。收到质粒后请短暂离心,加入20μl ddH2O溶解质粒,取2μl转化至对应感受态中,挑取单克隆重新提取质粒后使用。如需获取其他详细信息请登录我司官网查询。

基本信息

启动子: Lac/lac promoter
质粒大小: 5216bp
质粒标签: N-g3 signal,C-E tag
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: 大肠杆菌Stbl3
培养条件: 37℃,有氧,LB

质粒简介

       本系统是用于抗体基因表达,制备重组抗体。宿主菌 TG1 为质粒载体pCANTAB5e 复制和表达的宿主菌,无抗性,用 2×YT 培养基,37℃进行培养。载体 pCANTAB5e 为用于构建重组单链抗体 scFv 的载体,具有氨苄抗性,大小为4522bp,具体图谱及酶切位点如下示。辅助噬菌体 M13K07 用于拯救噬菌粒,具有卡那抗性,在其辅助下噬菌粒得以复制,并以融合的形式表达在噬菌体表面。在 scFv 基因后面含有一段编码 Tag 尾肽(E-Tag)的序列,在尾肽后面有一琥珀(Amber)终止密码子,位于 scFv 基因与 cpIII 基因之间,在抑制型** TG1 中,这种琥珀密码子只有 20%有效,故在蛋白翻译过程中可以通读而形成 scFv-cpIII融合蛋白;但在非抑制型菌株中,如 HB2151,此终止子被识别,同时 scFv 基因在翻译过程中在 cpIII 基因前终止,形成独立的抗体蛋白,滞留于细胞膜间隙,并在长时间培养后泄漏在培养液中,形成可溶性表达。
【操作方法】本方法来源于网络,本平台未做实验证实,仅供参考。

1. 辅助噬菌体毒种制备
       1) 将辅助噬菌体 M13K07 划线于 2×YT 琼脂平板上;
       2) 制备 2×YT 半固体琼脂(0.7%琼脂)为上层琼脂(Top Agar),冷却至 50 ℃时,取 4 mL Top Agar 并加入 0.5 mL 过夜培养的新鲜 TG1 菌(OD660 达 0.8),充分混匀,沿着划线浓度从低至高的方向,倾注 Top Agar;
       3) 37℃培养 6-12 小时,用接种针挑取单个噬菌斑,接种于 30-200 mL 2×YT-K(kanamycin 70 μg/mL),37℃充分振荡培养 10-14 小时;
       4) 8000 rpm 离心 15 min,4 ℃;
       5) 小心取上清,建议用 0.45μm 滤膜过滤后,分装无菌小管,存放 4℃至少可用半年。
2.噬菌体毒种的滴定
       1) 准备不含任何***的 2×YT 培养平板 5-6 个;
       2) 用 2×YT 培养基配制 0.7%琼脂平板,即为表层琼脂(Top Agar),冷却至 42℃并在 42℃恒温保存;
       3) 将上述噬菌体溶液用培养基做 10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 稀释;
       4) 取过夜培养的 TG1 菌液(OD660=1 左右),分装小试管,500μL /小试管,标明10-6 至 10-10 稀释度;
备注:宿主菌的制备请参照 TG1 菌株说明书进行。

       5) 加入以上步骤 3 中依次稀释的噬菌体 100μL 到每个相应的标准稀释度的试管中,充分混匀,37℃轻柔振荡反应 30 min;
       6) 加入 Top Agar 3 mL 至每个试管中,立即浇注事先准备好的平皿,37℃培养过夜;
       7) 计算平皿上的空斑数,乘于相应稀释倍数,一般浓度可达 1012pfu/mL。
【注意事项】

1.噬菌体毒种,在使用前应按以上推荐的方法进行浓度滴定;
2.噬菌体毒种存放在 4℃下即可,不可-20℃或更低温度冻存;

质粒图谱

质粒序列

LOCUS       Exported                5216 bp ds-DNA     circular SYN 27-OCT-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pCANTAB-5E(非空载)
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5216)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5216
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        96..200
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             201..1061
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      1232..1820
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     promoter        2144..2174
                     /label=lac promoter
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    2182..2198
                     /label=lac operator
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     misc_feature    2218..2315
                     /label=g3 signal
     misc_feature    2329..3066
                     /label=Stuffer(非空载)
     misc_feature    3075..3120
                     /label=E tag
     CDS             3520..4338
                     /codon_start=1
                     /label=fd gene 3
                     /translation="MFQNNRFRNRQGALTVYTGTVTQGTDPVKTYYQYTPVSSKAMYDA
                     YWNGKFRDCAFHSGFNEDPFVCEYQGQSSDLPQPPVNAGGGSGGGSGGGSEGGGSEGGG
                     SEGGGSEGGGSGGGSGSGDFDYEKMANANKGAMTENADENALQSDAKGKLDSVATDYGA
                     AIDGFIGDVSGLANGNGATGDFAGSNSQMAQVGDGDNSPLMNNFRQYLPSLPQSVECRP
                     YVFGAGKPYEFSIDCDKINLFRGVFAFLLYVATFMYVFSTFANILRNKES"
     rep_origin      complement(4560..5015)
                     /direction=LEFT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
        1 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt
       61 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt
      121 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat
      181 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt
      241 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg
      301 ctgaagatca gttgggtgct cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga
      361 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc
      421 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac
      481 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg
      541 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca
      601 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg
      661 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg
      721 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg
      781 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag
      841 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg
      901 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct
      961 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac
     1021 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact
     1081 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga
     1141 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt
     1201 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct
     1261 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc
     1321 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgttc
     1381 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc
     1441 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg
     1501 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt
     1561 cgtgcataca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg
     1621 agcattgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg
     1681 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt
     1741 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag
     1801 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt
     1861 gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta
     1921 ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt
     1981 cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc
     2041 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca
     2101 acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc
     2161 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg
     2221 accatgatta cgccaagctt tggagccttt tttttggaga ttttcaacgt gaaaaaatta
     2281 ttattcgcaa ttcctttagt tgttcctttc tatgcggccc agccggccat ggcccaggtg
     2341 aagctgcagc agtcaggacc tggcctggtg gcgccctcac agagcctgtc catcacatgc
     2401 accgtctcag ggttttcatt aaccagctat ggtgtacact gggttcgcca gcctccagga
     2461 aagggtctgg agtggctggg agtaatatgg gctggtggaa gcacaaacta taattcagct
     2521 ctcaaatcca gactgaacat cagcaaggac aactccaaga gccaagtttt cttaaaaatg
     2581 aacagtctcc aaactgatga cacagccatg tactactgtg ccagaaactg gggcagctac
     2641 tggtacttcg atgtctgggg ccaaggccac ggtcaccgtc tcctcagtgg aggcggttca
     2701 ggcggaggtg gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg acattgagct cacccagtct
     2761 ccagcaatca tgtctgcatc tccaggggaa aaggtcacca tgacctgcag ggccagctca
     2821 agtataagtt ccagttactt gcactggtac cagcagaagt caggcgcttc ccccaaaccc
     2881 ttgattcata ggacatccaa cctggcttct ggagtcccag ctcgcttcag tggcagtggg
     2941 tctgggacct cttactctct cacaatcagc agcgtggagg ctgaagatga tgcaacttat
     3001 tactgccagc agtggagtgg ttacccattc acgttcggtg ctgggaccaa gctcgagatc
     3061 aaacgggcgg ccgcaggtgc gccggtgccg tatccggatc cgctggaacc gcgtgccgca
     3121 tagactgttg aaagttgttt agcaaaacct catacagaaa attcatttac taacgtctgg
     3181 aaagacgaca aaactttaga tcgttacgct aactatgagg gctgtctgtg gaatgctaca
     3241 ggcgttgtgg tttgtactgg tgacgaaact cagtgttacg gtacatgggt tcctattggg
     3301 cttgctatcc ctgaaaatga gggtggtggc tctgagggtg gcggttctga gggtggcggt
     3361 tctgagggtg gcggtactaa acctcctgag tacggtgata cacctattcc gggctatact
     3421 tatatcaacc ctctcgacgg cacttatccg cctggtactg agcaaaaccc cgctaatcct
     3481 aatccttctc ttgaggagtc tcagcctctt aatactttca tgtttcagaa taataggttc
     3541 cgaaataggc agggtgcatt aactgtttat acgggcactg ttactcaagg cactgacccc
     3601 gttaaaactt attaccagta cactcctgta tcatcaaaag ccatgtatga cgcttactgg
     3661 aacggtaaat tcagagactg cgctttccat tctggcttta atgaggatcc attcgtttgt
     3721 gaatatcaag gccaatcgtc tgacctgcct caacctcctg tcaatgctgg cggcggctct
     3781 ggtggtggtt ctggtggcgg ctctgagggt ggcggctctg agggtggcgg ttctgagggt
     3841 ggcggctctg agggtggcgg ttccggtggc ggctccggtt ccggtgattt tgattatgaa
     3901 aaaatggcaa acgctaataa gggggctatg accgaaaatg ccgatgaaaa cgcgctacag
     3961 tctgacgcta aaggcaaact tgattctgtc gctactgatt acggtgctgc tatcgatggt
     4021 ttcattggtg acgtttccgg ccttgctaat ggtaatggtg ctactggtga ttttgctggc
     4081 tctaattccc aaatggctca agtcggtgac ggtgataatt cacctttaat gaataatttc
     4141 cgtcaatatt taccttcttt gcctcagtcg gttgaatgtc gcccttatgt ctttggcgct
     4201 ggtaaaccat atgaattttc tattgattgt gacaaaataa acttattccg tggtgtcttt
     4261 gcgtttcttt tatatgttgc cacctttatg tatgtatttt cgacgtttgc taacatactg
     4321 cgtaataagg agtcttaata agaattcact ggccgtcgtt ttacaacgtc gtgactggga
     4381 aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct tgcagcacat ccccctttcg ccagctggcg
     4441 taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag ttgcgcagcc tgaatggcga
     4501 atggcgcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatata
     4561 aattgtaaac gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt
     4621 ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agcccgagat
     4681 agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg tggactccaa
     4741 cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac catcacccaa
     4801 atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta aagggagccc
     4861 ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag ggaagaaagc
     4921 gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg taaccaccac
     4981 acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtactat ggttgctttg acgggtgcag
     5041 tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc
     5101 cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac
     5161 cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcga
//
产品留言
标题
联系人
联系电话
内容
验证码
点击换一张
注:1.可以使用快捷键Alt+S或Ctrl+Enter发送信息!
2.如有必要,请您留下您的详细联系方式!
  • 温馨提示:为规避购买风险,建议您在购买前务必确认供应商资质与产品质量。
  • 免责申明:以上内容为注册会员自行发布,若信息的真实性、合法性存在争议,平台将会监督协助处理,欢迎举报
产品留言
标题
内容
联系人
联系电话
电子邮件
公司名称
联系地址
验证码
点击换一张
注:1.可以使用快捷键Alt+S或Ctrl+Enter发送信息!
2.如有必要,请您留下您的详细联系方式!