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pCDNA3.1(-)
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pCDNA3.1(-)
产品资料
pCDNA3.1(-)
如果您对该产品感兴趣的话,可以
产品名称:
pCDNA3.1(-)
产品型号:
产品展商:
XYbscience
产品文档:
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简单介绍
pCDNA3.1(-)是来自pCDNA3的5.4kb载体,设计用于哺乳动物宿主中的高水平稳定和瞬时表达。大多数哺乳动物细胞可以进行高水平的稳定和非复制性瞬时表达。人类巨细胞病毒立即早期(CMV)启动子,用于在广泛哺乳动物细胞中的高水平表达。pCDNA3.1(-)前向(+)和反向(-)方向上的多个克隆位点,以促进克隆用于选择稳定细胞系的新霉素抗性基因。在潜伏感染SV40或表达SV40大T抗原(例如COS-1,COS-7)的细胞系中的异常复制。
产品描述
pCDNA3.1(-)
产品信息
基本信息
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
产品信息
产品货号
产品名称
产品规格
优惠价
XY0156
pCDNA3.1(-)
5μg
¥请询价
使用说明
信裕质粒平台的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证,如存在质量问题,请在收到产品的三个月内通知我司。收到质粒后请短暂离心,加入20μl ddH2O溶解质粒,取2μl转化至对应感受态中,挑取单克隆重新提取质粒后使用。如需获取其他详细信息请登录我司官网查询。
基本信息
启动子:
CMV promoter
复制子:
pUC ori,F1 ori
终止子:
BGH poly(A)signal
质粒分类:
哺乳系列质粒;哺乳表达质粒;pCDNA系列质粒
质粒大小:
5427bp
原核抗性:
氨苄青霉素(Ampicillin)
筛选标记:
新霉素(Neomycin)/遗传霉素(Geneticin/G418)
克隆菌株:
DH5α等大肠杆菌
培养条件:
37℃,有氧,LB
表达宿主:
293T等哺乳细胞
培养条件:
37℃,5%CO2
诱导方式:
无需诱导
5'测序引物:
pCDNA3.1-F(CTAGAGAACCCACTGCTTAC)
3'测序引物:
pCDNA3.1-R(TAGAAGGCACAGTCGAGG)
备注:
需要添加起始密码子ATG
质粒简介
pCDNA3.1(-)是来自pCDNA3的5.4kb载体,设计用于哺乳动物宿主中的高水平稳定和瞬时表达。大多数哺乳动物细胞可以进行高水平的稳定和非复制性瞬时表达。人类巨细胞病毒立即早期(CMV)启动子,用于在广泛哺乳动物细胞中的高水平表达。前向(+)和反向(-)方向上的多个克隆位点,以促进克隆用于选择稳定细胞系的新霉素抗性基因。在潜伏感染SV40或表达SV40大T抗原(例如COS-1,COS-7)的细胞系中的异常复制。
pCDNA 3.1(-) is 5.4 kb vector derived from pcDN3 and designed for high-level stable and transient expression in mammalian hosts. High-level stable and non-replicative transient expression can be carried out in most mammalian cells. The vectors contain the following elements:
Human cytomegalovirus immediate-early (CMV) promoter for high-level expression in a wide range of mammalian cells
Multiple cloning sites in the forward (+) and reverse (C) orientations to facilitate cloning
Neomycin resistance gene for selection of stable cell lines
Episomal replication in cells lines that are latently infected with SV40 or that express the SV40 large T antigen (e.g. COS-1, COS-7)
The control plasmid, pcDNA3.1/CAT, is included for use as a positive control for transfection and expression in the cell line of choice.
Use the following outline to clone and express your gene of interest in pcDNA 3.1.
1. Design the multiple cloning
2. Ligate your insert into the appropriate vector and transform into E. coli. Select
transformants on LB plates containing 100 g/ml ampicillin
3. Analyze your transformants for the presence of insert by restriction digestion.
4. Select a transformant with the correct restriction pattern and use sequencing to confirm that your gene is cloned in the proper orientation.
5. Transfect your construct into the mammalian cell line of interest using your own method of choice. Generate a stable cell line, if desired.
6. Test for expression of your recombinant gene by western blot analysis or
functional assay.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5427 bp ds-DNA circular SYN 18-9-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 10
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5427)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2016-9-18 from MiaoLingPlasmid
http://www.maiolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5427
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
polyA_signal 1027..1251
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 1297..1725
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1739..2068
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 1919..2054
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2135..2929
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3103..3224
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(3273..3289)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 3297..3313
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3321..3351)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3366..3387
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(3675..4260)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4431..5291)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5292..5396)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaacgg gccctctaga ctcgagcggc cgccactgtg ctggatatct gcagaattcc
961 accacactgg actagtggat ccgagctcgg taccaagctt aagtttaaac cgctgatcag
1021 cctcgactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct
1081 tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc
1141 attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg
1201 aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg gcttctgagg
1261 cggaaagaac cagctggggc tctagggggt atccccacgc gccctgtagc ggcgcattaa
1321 gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc
1381 ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag
1441 ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca
1501 aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc
1561 gccctttgac gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa
1621 cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggcct
1681 attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc gaattaattc tgtggaatgt
1741 gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat
1801 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag
1861 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat
1921 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt
1981 tatttatgca gaggccgagg ccgcctctgc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg
2041 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa gctcccggga gcttgtatat ccattttcgg
2101 atctgatcaa gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc
2161 aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat
2221 cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt
2281 caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg
2341 gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag
2401 ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc
2461 tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc
2521 tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga
2581 agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga
2641 actgttcgcc aggctcaagg cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg
2701 cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg
2761 tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc
2821 tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc
2881 cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg
2941 gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc
3001 gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc
3061 ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ccaacttgtt tattgcagct
3121 tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca
3181 ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctgtataccg
3241 tcgacctcta gctagagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt
3301 tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt
3361 gcctaatgag tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg
3421 ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg
3481 cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg
3541 cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat
3601 aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc
3661 gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc
3721 tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga
3781 agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt
3841 ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg
3901 taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc
3961 gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg
4021 gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc
4081 ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg
4141 ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc
4201 gctggtagcg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa
4261 gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa
4321 gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa
4381 tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc
4441 ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga
4501 ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca
4561 atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc
4621 ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat
4681 tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc
4741 attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt
4801 tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc
4861 ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg
4921 gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt
4981 gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg
5041 gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga
5101 aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg
5161 taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg
5221 tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt
5281 tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc
5341 atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca
5401 tttccccgaa aagtgccacc tgacgtc
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