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产品资料

黄曲霉素总量试剂盒

黄曲霉素总量试剂盒
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  • 产品名称:黄曲霉素总量试剂盒
  • 产品型号:
  • 产品展商:XYbscience
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简单介绍
黄曲霉素总量试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物黄���霉**和微孔条上预包被的偶联抗原竞争黄曲霉**抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,黄曲霉素总量试剂盒样本吸光值与其所含残留物黄曲霉**总类的含量成负相关,与标准曲线比较可得出相应残留物黄曲霉**(B1,B2,G1,G2,M1,M2)的总含量。
产品描述

黄曲霉素总量试剂盒


产品介绍

【产品简介】

黄曲霉**是一类**(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具有很强的致癌性,主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液,动物饲料相关的产品中。其中黄曲霉**(B1,B2,G1,G2,M1,M2)的毒性、致癌性、污染频率均居于首位。薄层色谱一直是检测黄曲霉**常用的方法,但是此方法制备样品及分析样品时费时又费力。而使用黄曲霉**总量 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉**(B1,B2,G1,G2,M1,M2)总量残留。

黄曲霉素总量试剂盒【测定原理】

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物黄曲霉**和微孔条上预包被的偶联抗原竞争黄曲霉**抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物黄曲霉**总类的含量成负相关,与标准曲线比较可得出相应残留物黄曲霉**(B1,B2,G1,G2,M1,M2)的总含量。

【试剂盒技术指标】  

规       格:96孔/盒

灵 敏 度: 0.05ppb

检测时间: 75min

样本检测下限:

食品(大米、玉米、小米、花生)…………………1ppb

饲料…………………………………………………2.5ppb

乳制品……………………………………………  0.25ppb

黄曲霉素总量试剂盒交叉率

黄曲霉**B1……………………………………115%

黄曲霉**B2……………………………………100%

黄曲霉**G1……………………………………98%

黄曲霉**G2……………………………………95%

黄曲霉**M1……………………………………85%

黄曲霉**M2……………………………………80%

回收率

食    品…………………………………………85±10%

饲    料…………………………………………75±10%

试剂盒组成  

1、     微量测试孔:(1X96孔板)每条8孔,一板12条

1、     标准液X6瓶:(1ml/瓶) 0ppb、0.025ppb、0.075ppb、0.225ppb、0.675ppb、2.025ppb

2、     酶标记物       12ml…………………………红色帽

3、     抗体工作液     7ml…………………………绿色帽

4、     底物液 A液    7ml…………………………白色帽

5、     底物液 B液    7ml…………………………黑色帽

6、     终 止 液          7ml…………………………黄色帽

7、     20X浓缩洗涤液40ml…………………… 透明帽

8、     5X浓缩样品稀释液50 ml…………………蓝色帽

黄曲霉素总量试剂盒【所用仪器、试剂】  

仪          器:微孔板酶标仪450nm/630nm、旋转蒸发仪/

                     氮气吹干装置、均质器、振荡器、离心机、

                     刻度移液管、天平(感量0.01g)

微量移液器:单道 20μl~200μl、100μl~1000μl、多道 250μl

试           剂:甲醇、三氯甲烷、正己烷、滤纸

样本前处理步骤  

处理任何样本时,都必须注意:

(a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。

(b)实验之前须检查实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。

样本前处理需配制:

配液1、样品提取液70%甲醇溶液:30ml蒸馏水或去离子水和70ml纯甲醇混合制备70%甲醇溶液。

配液2、将5X浓缩样品液用去离子水按照1:4稀释(1份浓缩样品液+4份去离子水)用于样品的稀释。

一、食品

(1)脂肪含量小的固体样品(如大米、玉米、小米等)

1、称取5g粉碎的样品于50ml离心管中,加入10ml 的样品提取液混合;强力振荡5min。

2、用Whatman No.1滤纸过滤;收集过滤液。

3、取出上清液50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s,取50ul进行分析。

          样本稀释倍数:40

(2)花生

1、称取5g粉碎的样品于50ml离心管中,先加入5ml 正己烷,再加入10ml的样品提取液混合;强力振荡5min;室温4000r/min以上,离心10min。

2、取下层溶液50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s,取50ul进行分析。

     样本稀释倍数:40

(3)食用油(如菜油、麻油、色拉油、花生油等)

1、称取5g油样品于50ml离心管中,先加入5ml 正己烷,再加入10ml的样品提取液混合;强力振荡5min;室温4000r/min以上,离心10min。

2、取下层溶液50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s,取50ul进行分析。

     样本稀释倍数:40

二、饲料

(1)一般饲料及原料(脂肪和蛋白含量小的饲料)

1、称取3g粉碎的样品于50ml离心管中,加入15ml 的样品提取液混合;强力振荡5分钟。

2、用Whatman No.1滤纸过滤;收集过滤液。

3、取出上清液50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s

      取50ul进行分析。

          样本稀释倍数:100

(2)配合料及浓缩料(脂肪和蛋白含量高的饲料)

1、称取2g样品于50ml离心管中,再加入10ml的样品提取液混合;强力振荡5min;

2、用Whatman No.1滤纸过滤;收集过滤液。

3、取过滤溶液5mL于50ml离心管中;加入10ml三氯甲烷,振荡5min,室温4000r/min以上,离心10min。

4、取出下层5ml的三氯甲烷到另一洁净容器中于50℃水浴中氮气/空气吹干。

5、加入1mL的样品提取液将充分溶解干燥物。

6、取50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s,取50ul进行分析。

          样本稀释倍数:40倍

三、乳制品

(1)生鲜牛奶;

 1、直接取50μl牛奶+450μl样品稀释液混合30s;

 2、取50μl用于检测检测分析。

          样本稀释倍数:10

2)奶粉、奶油、奶酪

1、称取5g样品于50ml离心管中,加入10ml甲醇,强力振荡5min;室温4000r/min以上,离心10min。

2、取2ml上清液,于50℃水浴中氮气/空气吹干。

3、用1ml正己烷溶解残留物,加入1ml稀释后的样品稀释液混合30s;室温4000r/min以上,离心5min,

4、取50ul下层溶液进行检测分析。

     样本稀释倍数:1

黄曲霉素总量试剂盒【备注

     如果样品中黄曲酶**的浓度比预计的浓度高,在样品测定前,样品必须进一步稀释,用样品稀释液将样品提取液再进一步进行适当倍数稀释,即为待测样品液; 取50ul待测样品液进行定量或限量测定。

酶标**分析程序

测定前应须知:

1、     使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20-25℃)。

2、     使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。

3、     在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、     在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。

操作步骤:

1、   将所需试剂从冷藏环境中取出,置室温(20-25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、   按板架及需要取出微孔条,将不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃。

3、   配液:将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水按照1:19稀释(1份浓缩洗涤液+19份去离子水),或按所需用量配制洗涤

        液。

4、  编号:将样本和标准品对应微孔按序编号每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、  标准品/样本50μl/孔到各自的微孔中,然后加抗体50μl/孔,用盖板膜封板,轻轻震荡混匀。37℃环境中反应30min。

6、  取出将孔内液体甩干,用洗液250μl/孔洗板4-5次,每次间隔15-30秒,用吸水纸拍干(拍干后未被**的气泡可用干净的枪头刺

       破)。

7、  每孔加入酶标记物100μl,盖板膜盖板后置37℃环境中反应30min。将孔内液体甩干,用洗涤液充分洗,4-5遍(同上),用吸水

      纸拍干(拍干后未被**的气泡可用干净的枪头刺破)。

8、   显色:每孔加入A液50μl,再加B液50μl,轻轻振荡混匀,37℃环境中避光显色15min。

9、  测定:每孔加入终止液50μl,轻轻振荡,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,在5min内读完数据)测定吸光

       度值(OD值)。

结果判定

结果判定有两种方法,粗略判定可用第1种方法,定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与黄曲霉**总类的含量成负相关。

1、粗略判定:

用样本的平均吸光度值与标准吸光度值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.340, 样本2的吸光度值为0.720,标准液吸光度值分别是:0ppb为1.810;0.025ppb为1.360;0.075ppb为1.080;0.225ppb为0.690; 0.675ppb为0.329;2.025ppb为0.178。则样本1的浓度范围是0.675ppb-2.025ppb; 样本2的浓度范围是0.075 ppb-0.225ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉**总类的实际含量。

2、定量判定:

所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以**个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

百分吸光度值(%)=

B

×100%

B0

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值

以标准品百分吸光率为纵坐标,以黄曲霉**标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉**总量实际浓度。

若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样品的准确、快速分析。

3、标准曲线:

B/B0 (%)


黄曲霉**总量试剂盒回归曲线

         0.025        0.075        0.225         0.675        2.025

黄曲霉**总量(ppb) [μg/kg]

图1:黄曲霉**总量检测试剂盒的回归曲线

4、再现性:

%CV

         黄曲霉**总量试剂盒精密度

     0     0.025   0.075   0.225  0.675  2.025

黄曲霉**总量(ppb) [μg/kg]

图2:黄曲霉**总量检测试剂盒的精密度

由多个不同的实验结果确定了精密度,图2显示出黄曲霉**总量检测试剂盒的精密度情况,获得的标准吸收值的变异系数(%CV)对相应黄曲霉**浓度作曲线,可以看到在全部范围内变异系数如此之低,可以得到很好的再现性。

注意事项

1、    使用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。试剂及标本没有回到室温(20-25℃)会导致所有标准的OD值偏低。

2、    在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会伴随着出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行

         下一步操作。

3、    混合要均匀,否则会出现重复性不好的现象。

4、    反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。

5、    不要使用过了有效日期的试剂盒,稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。

6、    不用的微孔板放进自封袋密封;标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。

7、    显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位(A450nm< 0.5 )时,表示试剂可能变质。

8、    该试剂盒*佳反应温度为37℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

【储存】

 原包装应储存于2~8℃保鲜冷藏,切勿冷冻。

【有效期】

 有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。


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