喹乙醇原药试剂盒
产品介绍
【产品简介】
喹乙醇又称喹酰胺醇，商品名为倍育诺、快育灵，由于喹乙醇有中度至明显的蓄积毒性，对大多数动物有明显的致畸作用，对人也有致畸形，致突变，致癌，因此喹乙醇在美国和欧盟都被禁止用作饲料添加剂。《中国兽药典》(2005 版)明确规定，喹乙醇被禁止用于家禽及水产养殖。本喹乙醇快速检测试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于动物组织（水产、鸡、猪、牛）、饲料等大批量样品中的喹乙醇快速检测。
喹乙醇原药试剂盒【测定原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测等样本中的喹乙醇，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性**化学反应的原理来进行的，样本中的喹乙醇和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗喹乙醇抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的喹乙醇含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出喹乙醇含量。
【试剂盒技术指标】
规 格：96孔/盒
灵 敏 度： 0.05ppb
检测时间： 75min
样本检测下限：
组 织………………………………15ppb
饲 料………………………………30ppb
交叉反应率：
喹乙醇……………………………… 100%
卡巴多………………………………﹤0.1%
回收率：
组 织………………………………80%±15%
饲 料………………………………70%±15%
喹乙醇原药试剂盒【试剂盒组成】
1、 微量测试孔：1×96孔板（12条×8孔）
2、 1ppm标准品浓缩液1瓶： 1ml/瓶
3、 酶标记物 12ml…………………红色帽
4、 抗体工作液 7ml…………………绿色帽
5、 底物A液 7 ml…………………白色帽
6、 底物B液 7 ml…………………黑色帽
7、 终止液 7 ml…………………黄色帽
8、 20X浓缩洗涤液 40 ml…………透明帽
9、 5X浓缩复溶液 50 ml…………蓝色帽
【所用仪器、试剂】
具备的仪器：微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器 、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管
微量移液器：单道20μl-200μl、100μl-1000μl、多道250μl
试 剂：甲醇、正己烷、去离子水（蒸馏水）
喹乙醇原药试剂盒【样本前处理步骤】
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
1、实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
2、实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制：
配液1、将5X浓缩复溶液用去离子水按照1：4稀释（1份浓缩复溶液+4份去离子水）用于样品稀释和标准应用液的配制。
配液2、样品提取液配制
取1ml甲醇与9ml去离子水混匀。( 1份甲醇+9份去离子水）
（a）组织（猪肝、猪肉、鱼、虾等）样本的处理方法
1、称1±0.05g均质后组织样本于50ml离心管中，加入5ml样品提取液充分混合30s,混匀,放置56度水浴10min；振荡2min；室温
4000r/min以上离心10min。
2、取出上清液1ml于离心管中，加入1 ml正己烷充分混合30s；室温4000r/min以上离心5min。
3、取50 μl下层溶液与样品稀释液950ul 充分混合30s取50μl进行分析。
样本稀释倍数：100
（b）饲料样品的处理方法
1、将饲料样品研碎，称1.0±0.05g研碎的饲料样品，加入10ml样品提取液配制，充分混合30s,放置56度水浴10min,剧烈震荡2min，；室温4000r/min以上离心10min。
2、取出上清液50ul与样本稀释液950ul 充分混合30s
3、取50ul上清进行分析。
样本稀释倍数:200
【酶标**分析程序】
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20-25℃平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、配制标准液
制备喹乙醇标准应用液：
取一定量的1ppm标准品浓缩液,用样品稀释液并混合均匀，现配现用。
标准液6：配制4.05ppb---4ul标准品浓缩液（1ppm）加980ul样品稀释液混匀；
标准液5：配制1.35ppb---300ul标准液6加600ul样品稀释液混匀；
标准液4：配制0.45ppb ----300ul标准液5加600ul样品稀释液混匀；
标准液3：配制0.15ppb ----300ul标准液4加600ul样品稀释液混匀；
标准液2：配制0.05ppb ----300ul标准液3加600ul样品稀释液混匀；
标准液1：配制0 ppb----直接用样品稀释液；
3、按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
4、配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水）或按所需用量配制洗涤液。
5、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
6、加标准品/样本50μl/孔到各自的微孔中，再加入50μl/孔的抗体工作液，用盖板膜盖板，轻轻振荡混匀，37℃环境反应30min 。
7、取出微孔板，甩出孔内液体，用洗涤液按250μl /孔洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，用吸水纸拍干（拍干后未**的气泡可用干净
的吸头刺破）。
8、每孔加入酶标记物100μl/孔，用盖板膜盖板后，37℃ 环境中反应30min。取出酶标板，如前述洗板5次。
9、显色：先加入底物液A液50μl/孔，再加入底物B液50μl/孔，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色反应15min。
10、测定：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据），
测定吸光度值（OD值）
喹乙醇原药试剂盒【结果判定】
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含喹乙醇的含量成负相关。
1、 粗略判定：
用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.250，样本2的吸光度值为0.720，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.610；0.05ppb为1.380；0.15ppb为1.100；0.45ppb为0.620；1.35ppb为0.289；4.05ppb为0.108。则样本1的浓度范围是1.35ppb-4.05ppb； 样本2的浓度范围是0.15 ppb-0.45 ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中喹乙醇实际浓度。
2、定量分析：
所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以**个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
以标准品百分吸光率为纵坐标，以喹乙醇标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中喹乙醇实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。
3、标准准曲线：
B/B0 (%)
0.05 0.15 0.45 1.35 4.05
Olaquindox (ppb) [μg/kg]
图1：喹乙醇检测试剂盒的回归曲线
4、再现性：
%CV
Olaquindox (ppb) [μg/kg]
图2：喹乙醇检测试剂盒的精密度
由多个不同的实验结果确定了精密度，图2显示出喹乙醇检测试剂盒的精密度情况，获得的标准吸收值的变异系数（%CV）对相应喹乙醇浓度作曲线，可以看到在全部范围内变异系数如此之低，可以得到很好的再现性。
【注意事项】
1、使用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。试剂及标本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下
一步操作。
3、 混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
4、 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、 不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
6、 不用的微孔板放进自封袋密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8、 该试剂盒*佳反应温度为37℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
【储存】
原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。
【有效期】
有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。
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