β兴奋剂试剂盒
产品介绍
【产品简介】
β-兴奋剂类(β-Agonists)**近年来被非法添加到饲料中以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物生长，因其添加剂量是**剂量的5-10倍，以至于在动物体内残留量高而给消费者带来危害。
β-兴奋剂类快速检测试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于动物组织（猪肉）、尿样、饲料等大批量样品中β-兴奋剂类**残留量的快速检测。
β兴奋剂试剂盒【测定原理】
本试剂盒采用间接竞争ELISA法检测尿样和组织等样本中的β-兴奋剂，在微孔条上预包被偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性**化学反应的原理来进行，样本中的β-兴奋剂和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗β-兴奋剂抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的β-兴奋剂含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出β-兴奋剂含量。
【试剂盒技术指标】
规 格：96孔/盒
灵 敏 度： 0.2ppb
检测时间： 75min
样本检测下限：
尿 样 ……… ……………………………………0.2ppb
组织（处理法一） ……………………………… 0.8ppb
组织（处理法二） ……………………………… 0.2ppb
饲 料 ……… ……………………………………2ppb
β兴奋剂试剂盒交叉反应率：
沙丁胺醇（Salbutamol ）……… …………………………100%
克伦特罗（Clenbuterol）……… …………………………95%
溴代克伦特罗（Bromchlorbuterol）……………… …… 120%
溴布特罗（Brombuterol）……… ……………………… 95%
马布特罗（Mabuterol）……… ………………………… 75%
克伦潘特罗（Clenpenterol）……… …………………… 70%
马喷特罗（Mapenterol）……… ………………………… 65%
特普他林（Tebutalin）……… ……………………………45%
卡布特罗(Carbuterol) ……… …………………………… 5%
克伦丙罗（Clenproperol）……… ……………………… 15%
西马特罗（Cimaterol）……… ………………………… 12%
多巴酚丁胺（Dobutamine) ……… …………………… ＜1%
利托君（Ritodrine）……… ……………………………＜0.1%
莱克多巴胺（Ractopamine）……… ………………… ＜0.1%
样本回收率：
尿样、血清 …………………………………………95%±10%
组 织 …………………………………………… 80%±10%
饲 料 …………………………………………… 80%±15%
【试剂盒组成】
1、 微量测试孔：1×96孔板（12条×8孔）
2、 标准溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.2ppb、0.6ppb、1.8ppb、5.4ppb、16.2ppb
3、 酶标记物 12ml ………………………………………… 红色帽
4、 抗体工作液 10ml …………………………………………绿色帽
5、 底物A液 7ml ……………………………………………棕色帽
6、 底物B液 7ml …………………………………………… 黑色帽
7、 终止液 7ml …………………………………………… 黄色帽
8、 20X 浓缩洗涤液 40 ml……………………………………白色帽
β兴奋剂试剂盒【 所用仪器、试剂】
具备的仪器：微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器 、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管
微量移液器：单道20μl-200μl、100μl-1000μl、多道250μl
试 剂：氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、乙腈、无水硫酸钠、甲醇
【实验前溶液配制】
配液1、0.1M HCl 溶液取0.86ml浓HCl加水定溶至100ml。
配液2、0.1M NaOH 溶液称取0.4g NaOH加水定溶至100ml。
配液3、乙腈-0.1M HCl 溶液 V乙腈：VHCl =84：16
配液4、将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。
【样本前处理步骤】
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（c）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
样本前处理方法：
（a）尿样本的处理方法
取20μl清亮尿样直接测定（如果尿样浑浊一定要 过滤或离心10min，4000r/min，直至得到清亮尿样），暂不使用的样本应冷冻保存。 样本稀释倍数：1
（b））猪肝、猪肉等组织处理方法一
1、 称2±0.05g组织，加入6ml去离子水，充分振荡2min，室温4000r/min以上离心10min。
2、 取20μl上清液进行分析。
样本稀释倍数：4
（c）猪肝、猪肉等组织处理方法二
1、 称取 2 ± 0.05g 的组织， 加入6ml乙腈-0.1MHCl，振荡2min,室温4000r/min以上离心10min。
2、 取上清3ml，加入2ml 0.1M NaOH，加入6ml乙酸乙酯，振荡1min，室温4000r/min 以上离心10min。取全部上清于50℃氮气或空气吹干。
3、 加入1ml三蒸水复溶，混合30s，取20μl进行分析。
样本稀释倍数：1
（d）饲料样品的处理方法
1. 称1.0±0.05g研碎的饲料样品，加入10ml水，放振荡器上振荡2min；15℃ 4000r/min以上离心10min；
2. 吸出离心后的上清液1ml，于56℃氮气吹干，用1 ml 去离子水溶解干燥的残留物，再加入1mL正己烷混合30s ；15℃ 4000r/min以上离心5min。
3. 取20μl下层进行分析。
样本稀释倍数：10
（e）熟食处理方法
1、将样本均质，称 2±0.05g 组织到 50ml离心管中， 加入 10ml甲醇，振荡 2min,置85℃水浴 10min，室温 4000r/min 以上离心 5min，倒去上层甲醇；
2、接方法（一）或者方法（二）第 2 步处理方法；
注：样本稀释倍数与后接的处理方法相同
【酶标**分析程序】
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20-25℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4、往酶标板微孔中加标准溶液或试样液 20μl/孔，然后加入 β-兴奋剂抗体工作液 80μl/孔，用盖板膜封板，25℃环境中反应 30min。
5、倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，去除孔中液体。加入 250μl/孔洗涤液，15-30s 后倒出孔中液体，用吸水纸拍干，如此重复操作共洗板 5 次。
6、酶标记物：加入酶标记物 100μl/孔，用盖板膜封板，25℃环境中反应 30min。取出酶标板，如前述洗板 5 次；
7、显色：每孔先加入底物液A液50μl，再加底物B液50μl，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。
8、测定：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据），测定吸光度值（OD值）。
β兴奋剂试剂盒【结果判定】
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含β-兴奋剂的含量成负相关。
1、粗略判定：
用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出样本所含β-兴奋剂浓度范围（ng/ml）。假设样品1的吸光度值为0.313，样品2的吸光度值为1.032，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.892；0.2ppb为1.501；0.6ppb为1.175； 1.8ppb为0.751；5.4ppb为0.421； 16.2ppb为0.198。则样品1的浓度范围是5.4ppb-16.2ppb；样品2的浓度范围是0.6ppb-1.8ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中β-兴奋剂实际浓度。
2、定量分析：
所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以**个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
以标准品百分吸光率为纵坐标，以β-兴奋剂标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中β-兴奋剂实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。
3、标准曲线：
B/B0 (%)
0.2 0.6 1.8 5.4 16.2
β-兴奋剂(ppb) [μg/kg]
图1：β-兴奋剂检测试剂盒的回归曲线
4、再现性：
%CV
0 0.2 0.6 1.8 5.4 1.62
β-兴奋剂(ppb) [μg/kg]
图2：β-兴奋剂检测试剂盒的精密度
由多个不同的实验结果确定了精密度，图2显示出β-兴奋剂检测试剂盒的精密度情况，获得的标准吸收值的变异系数（%CV）对相应β-兴奋剂浓度作曲线，可以看到在全部范围内变异系数如此之低，可以得到很好的再现性。
【注意事项】
1、使用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。试剂及标本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一
步操作。
3、混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
6、不用的微孔板放进自封袋密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8、该试剂盒*佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
【储存】
原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。
【有效期】
有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。
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