pUCm-T载体
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XY2006
20次
253.00元
pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。 很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3'端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3'端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片段的重组载体。
pUCm-T载体的主要信息如下:
Base pairs
2773
Lac Z promoter
142-171
M13/pUC Sequencing Primer
204-221
Lac Z
222-534
Multiple cloning region
233-376
M13/pUC Reverse Primer
378-395
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region
972-1832
ColE1 origin of replication(rep)
1987-2606
pUCm-T载体的图谱如图1：
pUCm-T载体的多克隆位点的详细序列如下(请特别注意其中的Pst I不是单酶切位点)：
201
ACACAGGAAA
CAGCTATGAC
CATGATTACG
CCAAGCTTGC
ATGCCTGCAG
TGTGTCCTTT
GTCGATACTG
GTACTAATGC
GGTTCGAACG
TACGGACGTC
Xba I Xho I BamH I Bgl II
251
GTCGACTCTA
GACTCGAGGG
ATCCAGATCT
CCAGTCTT GA
CCTGGTCTGC
CAGCTGAGAT
CTGAGCTCCC
TAGGTCTAGA
GGTCAGA TCT
GGACCAGACG
Pst I Not I Nco I EcoR V Cla I Nde I T7 promoter
301
AGGCGGCCGC
CCATGGGATA
TCATCGATCA
TATGTCGC
CC
TATAGTGAGT
TCCGCCGGCG
GGTACCCTAT
AGTAGCTAGT
ATACAGCG
GG
ATATCACTCA
Kpn I Sac I EcoR I
351
CGTATTACGG
TACCGAGCTC
GAATTCACTG
GCCGTCGTTT
TACAACGTCG
GCATAATGCC
ATGGCTCGAG
CTTAAGTGAC
CGGCAGCAAA
ATGTTGCAGC
pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：
Afl II
Age I
Apa I
Asc I
Avr II
Bbs I
Bbv II
Bcl I
Blp I
BsaA I
BseR I
Bsg I
BsiC I
BsiW I
Bsm I
BsmF I
Bsp120 I
BspM II
BsrG I
BssH II
Bst1107 I
BstB I
BstE II
BstX I
Bsu36 I
Dra III
Eco47 III
Eco72 I
Esp I
Fse I
Hpa I
Mlu I
Msc I
Mun I
Nae I
NgoM I
Nhe I
Nru I
Nsi I
PflM I
Pme I
Pml I
PpuM I
PspA I
Rsr II
Sac II
Sfi I
Sma I
SnaB I
Spe I
Spl I
Srf I
Stu I
Xca I
Xma I
pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：
HinD III
A`AGCT,T
234
Acc65 I
G`GTAC,C
360
BspM I
ACCTGC 10/14
239
Asp718
Sph I
G,CATG`C
244
Kpn I
G,GTAC`C
364
Sal I
G`TCGA,C
252
Ban II
G,RGCY`C
370
Acc I
GT`MK,AC
253
Sac I
G,AGCT`C
HinC II
GTY|RAC
254
Apo I
R`AATT,Y
372
Hind II
EcoR I
G`AATT,C
Xba I
T`CTAG,A
258
Kas I
G`GCGC,C
533
Ava I
C`YCGR,G
264
Nar I
GG`CG,CC
534
PaeR7 I
C`TCGA,G
Ehe I
GGC|GCC
535
Xho I
Bbe I
G,GCGC`C
537
BamH I
G`GATC,C
270
EcoO109 I
RG`GNC,CY
780
BsaB I
GATNN|NNATC
275
Aat II
G,ACGT`C
841
Bgl II
A`GATC,T
276
Ssp I
AAT|ATT
955
Xcm I
CCANNNN,N`NNNNTGG
289
Xmn I
GAANN|NNTTC
1160
Tth111 I
GACN`N,NGTC
293
Bsp1286 I
G,DGCH`C
1177
Not I
GC`GGCC,GC
305
Sca I
AGT|ACT
1279
Eag I
C`GGCC,G
EcoN I
CCTNN`N,NNAGG
1399
Xma III
Cfr10 I
R`CCGG,Y
1675
Dsa I
C`CRYG,G
312
Bsa I
GGTCTC 7/11
1694
Nco I
C`CATG,G
Ahd I
GACNN,N`NNGTC
1760
Sty I
C`CWWG,G
AlwN I
CAG,NNN`CTG
2239
EcoR V
GAT|ATC
320
Afl III
A`CRYG,T
2648
Cla I
AT`CG,AT
325
Sap I
GCTCTTC 8/11
2765
pUCm-T载体的全序列信息： XY2006 pUCm-T vector-seq.txt pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成，除多克隆位点外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number M77789)。 少量自连的载体转化得到的克隆由于编码了LacZ基因，而在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色。大部分重组的载体，由于插入片段破坏了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上转化得到白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆，蓝白斑筛选结果示意图如图2。
图2. pUCm-T载体的蓝白斑筛选结果示意图。pUCm-T载体和PCR产物片段进行连接，转化后在IPTG/X-Gal平板的上长出的克隆，其中白色克隆代表PCR产物片段可能插入到pUCm-T载体中，但后续还需要酶切、PCR或者测序确认。
对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定，也可以使用廉价且高效的EcoRI、 BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。 构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。 构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录，用于探针标记等。 一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。 包装清单：
包装
20μl
—
说明书
1份
保存条件： -20℃保存。 注意事项： 本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。 DNA聚合酶是否可以在PCR产物3'端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况，不适合用于T载体的连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3'端加A的反应，再用T载体进行克隆。 进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。 本产品**于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或**，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。