pGL6-miR (报告基因质粒)
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XY2106
1μg
888.00元
pGL6-miR (报告基因质粒)是自行研发的一种用于microRNA(miRNA)等研究的萤光素酶报告基因质粒。该质粒可用于把目的基因的3'非翻译区(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它适当序列插入到其多克隆位点，然后在哺乳动物细胞中高灵敏度地检测特定microRNA(miRNA)或其它非编码RNA等对该基因3'-UTR或其它靶序列调控活性的报告基因质粒。 萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。 pGL6-miR以的pGL6质粒为模板，具有氨苄青霉素抗性，并在萤火虫萤光素酶基因之后添加了多克隆位点，便于插入目的基因的3'-UTR或其它适当的靶序列。 pGL6-miR的主要工作原理是，把目的基因的3'非翻译区(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它适当序列插入到萤光素酶基因(luc2)的下游，转染细胞并检测萤光素酶的表达。如果细胞内源或外源表达的miRNA与靶序列结合，通常会抑制萤光素酶的翻译或促进mRNA的降解，从而使萤光素酶的表达量减少。因此通过本报告基因质粒检测萤光素酶的表达水平，可以检测内源或外源表达的miRNA是否对插入的靶序列有调控作用。并且可以通过靶序列中预测的miRNA结合位点的突变，用于比较突变前后萤光素酶表达水平的变化。如果预测的miRNA位点突变后，miRNA的调控作用消失，则基本上说明突变的位点就是miRNA在靶序列中具体的结合位点。 pGL6-miR带有中低等强度的PGK启动子，有利于检测miRNA等对于萤火虫萤光素酶表达水平的下调作用，即当miRNA的抑制作用较弱时也能检测到。并且PGK启动子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母细胞中都可以发挥作用。 pGL6-miR质粒的主要信息如下：
Base pairs
6097bp
Feature Nucleotide
Position
PGK promoter
20-538
luc2 reporter gene
549-2202
Multiple cloning region
2208-2261
SV40 late poly（A） sinal
2268-2512
SV40 early enhancer/promoter
2554-2972
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region
2998-3792
Synthetic poly(A) signal
3817-3865
Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region
4980-5840
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site
5945-6097
pGL6-miR质粒图谱如下：
pGL6-miR质粒的多克隆位点的详细图谱如下(请特别注意其中的NheI不是单酶切位点)：
KpnI NheI
2169
AGGCCAAGAA
GGGCGGCAAG
ATCGCCGTGT
AAAGATCC
GG
TACCGCTAGC
TCCGGTTCTT
CCCGCCGTTC
TAGCGGCACA
TTTCTAGG
CC
ATGGCGATCG
BamHI EcoRV XhoI SacI MluI BglII HindIII
2220
GGATCCGATA
TCCTCGAGGA
GCTCACGCGT
AGATCTAAGC
TT
CGATCTCG
CCTAGGCTAT
AGGAGCTCCT
CGAGTGCGCA
TCTAGATTCG
AA
GCTAGAGC
pGL6-miR中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pGL6-miR)包括：
Aat II
Afl II
Asc I
Ase I
Bsa I
BsaA I
BsiW I
BssH II
Eco72 I
EcoR I
Nde I
Nru I
PflM I
Pme I
Pml I
Psp1406 I
PspA I
Rsr II
Sam I
SnaB I
Spl I
Srf I
Tth111 I
Vsp I
Xcm I
pGL6-miR中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pGL6-miR once)包括：
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
9
Sal I
G`TCGA,C
3881
BspM II
T`CCGG,A
445
EcoN I
CCTNN`N,NNAGG
3472
BsaB I
GATNN|NNATC
997
Xba I
T`CTAG,A
3796
BsrG I
T`GTAC,A
1040
BsiC I
TT`CG,AA
3867
Dra III
CAC,NNN`GTG
1696
BstB I
Acc65 I
G`GTAC,C
2209
ApaL I
G`TGCA,C
4445
Asp718
Ple I
GAGTC 9/10
4510
Kpn I
G,GTAC`C
2213
HgiE II
ACCNNNNNNGGT -1/13
4710
BamH I
G`GATC,C
2221
Not I
GC`GGCC,GC
4951
EcoR V
GAT|ATC
2229
BstX I
CCAN,NNNN`NTGG
4975
PaeR7 I
C`TCGA,G
2233
Pst I
C,TGCA`G
Xho I
BstE II
G`GTNAC,C
4978
Sac I
G,AGCT`C
243
Ahd I
GACNN,N`NNGTC
5053
Mlu I
A`CGCG,T
2245
Bsu36 I
CC`TNA,GG
5409
Bgl II
A`GATC,T
2251
Pvu I
CG,AT`CG
5423
HinD III
A`AGCT,T
2257
Sac II
CC,GC`GG
5447
Apo I
R`AATT,Y
2361
Bst1107 I
GTA|TAC
5563
Mun I
C`AATT,G
2425
Xca I
pGL6-miR质粒中推荐使用的测序引物序列如下： Forward primer (2135-2154): 5′GTTGGACGCCCGCAAGATCC 3′ Reverse primer (2303-2322): 5′GGTTTGTCCAAACTCATCAA 3′ pGL6-miR的全序列信息：XY2106 pGL6-miR-seq.txt 包装清单：
包装
—
说明书
1份
保存条件： -20℃保存。 注意事项： 本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。 本产品**于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或**，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。