pCMV-N-BFP (蓝色荧光蛋白)
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XY2701
1μg
888.00元
pCMV-N-BFP是自行研发的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达N端含BFP(Blue Fluorescent Protein, 蓝色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个BFP的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有BFP标签的融合蛋白。利用BFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用BFP抗体来检测或**沉淀融合蛋白。BFP与GFP高度相似，可尝试用GFP抗体检测BFP。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。 pCMV-N-BFP质粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
CMV promoter
1-602
T3 promoter and T3 primer binding site
620-639
BFP
677-1393
Multiple cloning site
1394-1483
T7 promoter and T7 primer binding site
1503-1524
SV40 polyA signal
1536-1919
f1 origin of ss-DNA replication
2057-2363
bla promoter
2388-2512
SV40 promoter
2532-2870
Neomycin/kanamycin resistance ORF
205-3696
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3697-4155
pUC origin
4284-4951
pCMV-N-BFP质粒(5003bp)的图谱如下：
pCMV-N-BFP的多克隆位点的详细图谱如下：
SacIBFP
651
GAGCTCTAGC
GCTACCGGTC
GCCACC
ATGG
TGAGCAAGGG
CGAGGAGCTG
CTCGAGATCG
CGATGGCCAG
CGGTGG
TACC
ACTCGTTCCC
GCTCCTCGAC
701
TTCACCGGGG
TGGTGCCCAT
CCTGGTCGAG
CTGGACGGCG
ACGTAAACGG
AAGTGGCCCC
ACCACGGGTA
GGACCAGCTC
GACCTGCCGC
TGCATTTGCC
751
CCACAAGTTC
AGCGTGTCCG
GCGAGGGCGA
GGGCGATGCC
ACCTACGGCA
GGTGTTCAAG
TCGCACAGGC
CGCTCCCGCT
CCCGCTACGG
TGGATGCCGT
801
AGCTGACCCT
GAAGTTCATC
TGCACCACCG
GCAAGCTGCC
CGTGCCCTGG
TCGACTGGGA
CTTCAAGTAG
ACGTGGTGGC
CGTTCGACGG
GCACGGGACC
851
CCCACCCTCG
TGACCACCCT
GAGCCACGGC
GTCCAGTGCT
TCAGCCGCTA
GGGTGGGAGC
ACTGGTGGGA
CTCGGTGCCG
CAGGTCACGA
AGTCGGCGAT
901
CCCCGACCAC
ATGAAGCAGC
ACGACTTCTT
CAAGTCCGCC
ATGCCCGAAG
GGGGCTGGTG
TACTTCGTCG
TGCTGAAGAA
GTTCAGGCGG
TACGGGCTTC
951
GCTACGTCCA
GGAGCGCACC
ATCTTCTTCA
AGGACGACGG
CAACTACAAG
CGATGCAGGT
CCTCGCGTGG
TAGAAGAAGT
TCCTGCTGCC
GTTGATGTTC
1001
ACCCGCGCCG
AGGTGAAGTT
CGAGGGCGAC
ACCCTGGTGA
ACCGCATCGA
TGGGCGCGGC
TCCACTTCAA
GCTCCCGCTG
TGGGACCACT
TGGCGTAGCT
1051
GCTGAAGGGC
ATCGACTTCA
AGGAGGACGG
CAACATCCTG
GGGCACAAGC
CGACTTCCCG
TAGCTGAAGT
TCCTCCTGCC
GTTGTAGGAC
CCCGTGTTCG
1101
TGGAGTACAA
CTTCAACAGC
CACAACGTCT
ATATCATGGC
CGACAAGCAG
ACCTCATGTT
GAAGTTGTCG
GTGTTGCAGA
TATAGTACCG
GCTGTTCGTC
1151
AAGAACGGCA
TCAAGGCGAA
CTTCAAGATC
CGCCACAACA
TCGAGGACGG
TTCTTGCCGT
AGTTCCGCTT
GAAGTTCTAG
GCGGTGTTGT
AGCTCCTGCC
1201
CAGCGTGCAG
CTCGCCGACC
ACTACCAGCA
GAACACCCCC
ATCGGCGACG
GTCGCACGTC
GAGCGGCTGG
TGATGGTCGT
CTTGTGGGGG
TAGCCGCTGC
1251
GCCCCGTGCT
GCTGCCCGAC
AGCCACTACC
TGAGCACCCA
GTCCGCCCTG
CGGGGCACGA
CGACGGGCTG
TCGGTGATGG
ACTCGTGGGT
CAGGCGGGAC
1301
AGCAAAGACC
CCAACGAGAA
GCGCGATCAC
ATGGTCCTGC
TGGAGTTCGT
TCGTTTCTGG
GGTTGCTCTT
CGCGCTAGTG
TACCAGGACG
ACCTCAAGCA
BamHI HindIII
1351
GACCGCCGCC
GGGATCACTC
TCGGCATGGA
CGAGCTGTAC
AAG
GGATCCA
CTGGCGGCGG
CCCTAGTGAG
AGCCGTACCT
GCTCGACATG
TTC
CCTAGGT
PstI EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI SpeI
1401
AGCTTCTGCA
GGAATTCGAT
ATCGTCGACA
GATCTCTCGA
GTCTAGAACT
TCGAAGACGT
CCTTAAGCTA
TAGCAGCTGT
CTAGAGAGCT
CAGATCTTGA
ApaI
1451
AGTGGGCCCG
GTACCTTAAT
TAATTAAGGT
ACC
TCACCCGGGC
CATGGAATTA
ATTAATTCCA
TGG
pCMV-N-BFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-BFP)包括：
AclI
AflII
AhdI
AscI
AsiSI
BaeI
BbsI
BbvCI
BlpI
BmgBI
BsiWI
BsmBI
BspEI
BspQI
BssHII
BstEII
BstXI
BstZ17I
EarI
EcoNI
FseI
PspXI
SapI
SbfI
ScaI
SgrAI
SmaI
SwaI
TspMI
XcmI
XmaI
XmnI
pCMV-N-BFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-BFP once)包括：
NdeI
CA`TA,TG
240
PvuI
CG,AT`CG
1534
SnaBI
TAC|GTA
346
BclI
T`GATC,A
1690
CspCI
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`
380
MfeI
C`AATT,G
1783
NheI
G`CTAG,C
597
HpaI
GTT|AAC
1796
BmtI
G,CTAG`C
BtsI
GCAGTG,NN`
1870
SacI
G,AGCT`C
MluI
A`CGCG,T
1919
Eco53kI
GAG|CTC
653
BsaXI
,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN`
2080
AfeI
AGC|GCT
660
DraIII
CAC,NNN`GTG`
2146
AgeI
A`CCGG,T
664
SfiI
GGCCN,NNN`NGGCC
2805
BcgI
,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`
765
StuI
AGG|CCT
2854
BsrGI
T`GTAC,A
1386
ClaI
AT`CG,AT
2873
BamHI
G`GATC,C
1394
BspDI
HindIII
A`AGCT,T
1400
EagI
C`GGCC,G
2939
PstI
C,TGCA`G
1406
KasI
G`GCGC,C
3032
EcoRI
G`AATT,C
1412
PluTI
G,GCGC`C
EcoRV
GAT|ATC
1420
NarI
GG`CG,CC
3033
SalI
G`TCGA,C
1424
SfoI
GGC|GCC
3034
AccI
GT`MK,AC
1425
MscI
TGG|CCA
3115
BglII
A`GATC,T
1430
PflFI
GACN`N,NGTC
3151
BsoBI
C`YCGR,G
1436
Tth111I
PaeR7I
C`TCGA,G
BsrDI
GCAATG,NN`
3264
AvaI
RsrII
CG`GWC,CG
3549
XhoI
BstBI
TT`CG,AA
3715
XbaI
T`CTAG,A
1442
BsaI
GGTCTCN`NNNN,
4022
SpeI
A`CTAG,T
1448
ApaLI
G`TGCA,C
4637
PspOMI
G`GGCC,C
1454
PciI
A`CATG,T
4951
G,GGCC`C
pCMV-N-BFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下： N-BFP primer (1284-1303): 5′-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3′ T7 primer (1503-1524): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′ pCMV-N-BFP的全序列信息：XY2701 pCMV-N-BFP-seq.txt pCMV-N-BFP质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。
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