pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒)
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XY2802
1μg
888.00元
pFastBac1-EGFP是以pFastBac1为基础构建的用于在昆虫细胞表达EGFP的质粒。在polyhedrin (PH)启动子的作用下，可以高效启动EGFP在昆虫细胞(如Sf9和Sf21等)中的表达。 在采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达目的蛋白时，pFastBac1-EGFP可以用作监测转染、病毒包装和目的蛋白表达效果的对照质粒。表达的EGFP有很强的绿色荧光，在荧光显微镜下可以非常方便地观察转染、病毒包装和表达的效果。 pFastBac1是基于Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而设计的表达载体。Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是由Luckow等人于1993年发展的一种快速而有效产生重组杆状病毒的方法。该系统主要包括以下两个组分：(1)用于插入目的基因的pFastBac载体，目的基因如EGFP等插入后受杆状病毒特异性启动子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin启动子调控表达；(2)含杆状病毒穿梭载体bacmid (bMON14272, 136kb)和辅助质粒(helper plasmid，用于表达转座必须的转座蛋白)的大肠杆菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。将pfastBac重组质粒转化该菌株可发生pfastBac重组质粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7发生转座，从而形成重组的bacmid。位点特异的转座会破坏宿主的lacZα基因，从而可通过蓝白斑筛选重组克隆。PCR等方法鉴定重组克隆后，提取重组的bacmid转染昆虫细胞，可以产生重组杆状病毒，并表达目的蛋白如EGFP等。扩增重组的杆状病毒并感染昆虫细胞，就可以大量表达纯化目的蛋白了。 pFastBac1-EGFP质粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
f1 origin
2-457
Ampicillin resistance gene
589-1449
pUC origin
1594-2267
Tn 7R
2511-2735
Gentamicin resistance gene
2802-3335
Polyhedrin promoter (PPH)
3904-4032
EGFP
4038-4757
SV40 polyadenylation signal
4794-5021
Tn 7L
5050-5215
pFastBac1-EGFP质粒(5397bp)的图谱如下：
pFastBac1-EGFP的详细图谱如下：
BamHI EGFP
4031
CGGATCC
ATG
GTGAGCAAGG
GCGAGGAGCT
GTTCACCGGG
GTGGTGCCCA
GCCTAGG
TAC
CACTCGTTCC
CGCTCCTCGA
CAAGTGGCCC
CACCACGGGT
4081
TCCTGGTCGA
GCTGGACGGC
GACGTAAACG
GCCACAAGTT
CAGCGTGTCC
AGGACCAGCT
CGACCTGCCG
CTGCATTTGC
CGGTGTTCAA
GTCGCACAGG
4131
GGCGAGGGCG
AGGGCGATGC
CACCTACGGC
AAGCTGACCC
TGAAGTTCAT
CCGCTCCCGC
TCCCGCTACG
GTGGATGCCG
TTCGACTGGG
ACTTCAAGTA
4181
CTGCACCACC
GGCAAGCTGC
CCGTGCCCTG
GCCCACCCTC
GTGACCACCC
GACGTGGTGG
CCGTTCGACG
GGCACGGGAC
CGGGTGGGAG
CACTGGTGGG
4231
TGACCTACGG
CGTGCAGTGC
TTCAGCCGCT
ACCCCGACCA
CATGAAGCAG
ACTGGATGCC
GCACGTCACG
AAGTCGGCGA
TGGGGCTGGT
GTACTTCGTC
4281
CACGACTTCT
TCAAGTCCGC
CATGCCCGAA
GGCTACGTCC
AGGAGCGCAC
GTGCTGAAGA
AGTTCAGGCG
GTACGGGCTT
CCGATGCAGG
TCCTCGCGTG
4331
CATCTTCTTC
AAGGACGACG
GCAACTACAA
GACCCGCGCC
GAGGTGAAGT
GTAGAAGAAG
TTCCTGCTGC
CGTTGATGTT
CTGGGCGCGG
CTCCACTTCA
4381
TCGAGGGCGA
CACCCTGGTG
AACCGCATCG
AGCTGAAGGG
CATCGACTTC
AGCTCCCGCT
GTGGGACCAC
TTGGCGTAGC
TCGACTTCCC
GTAGCTGAAG
4431
AAGGAGGACG
GCAACATCCT
GGGGCACAAG
CTGGAGTACA
ACTACAACAG
TTCCTCCTGC
CGTTGTAGGA
CCCCGTGTTC
GACCTCATGT
TGATGTTGTC
4481
CCACAACGTC
TATATCATGG
CCGACAAGCA
GAAGAACGGC
ATCAAGGTGA
GGTGTTGCAG
ATATAGTACC
GGCTGTTCGT
CTTCTTGCCG
TAGTTCCACT
4531
ACTTCAAGAT
CCGCCACAAC
ATCGAGGACG
GCAGCGTGCA
GCTCGCCGAC
TGAAGTTCTA
GGCGGTGTTG
TAGCTCCTGC
CGTCGCACGT
CGAGCGGCTG
4581
CACTACCAGC
AGAACACCCC
CATCGGCGAC
GGCCCCGTGC
TGCTGCCCGA
GTGATGGTCG
TCTTGTGGGG
GTAGCCGCTG
CCGGGGCACG
ACGACGGGCT
4631
CAACCACTAC
CTGAGCACCC
AGTCCGCCCT
GAGCAAAGAC
CCCAACGAGA
GTTGGTGATG
GACTCGTGGG
TCAGGCGGGA
CTCGTTTCTG
GGGTTGCTCT
4681
AGCGCGATCA
CATGGTCCTG
CTGGAGTTCG
TGACCGCCGC
CGGGATCACT
TCGCGCTAGT
GTACCAGGAC
GACCTCAAGC
ACTGGCGGCG
GCCCTAGTGA
HindIII
4731
CTCGGCATGG
ACGAGCTGTA
CAAGTAA
AAG
CTTGTCGAGA
AGTACTAGAG
GAGCCGTACC
TGCTCGACAT
GTTCATT
TTC
GAACAGCTCT
TCATGATCTC
pFastBac1-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-EGFP)包括：
AatII
Acc65I
AfeI
AflII
AgeI
ApaI
AscI
AsiSI
BbvCI
BfuAI
BlpI
BmgBI
BmtI
BsiWI
BspDI
BspMI
BssHII
BstAPI
BstBI
BstEII
Bsu36I
ClaI
CspCI
Eco53kI
EcoNI
EcoO109I
EcoRI
FseI
KasI
KpnI
MluI
NarI
NdeI
NheI
NotI
NruI
NsiI
PacI
PaeR7I
PflMI
PluTI
PmeI
PmlI
PpuMI
PshAI
PspOMI
PspXI
PstI
PvuII
RsrII
SacI
SalI
SbfI
SexAI
SfiI
SfoI
SgrAI
SmaI
SpeI
SphI
SrfI
StuI
SwaI
TspMI
XbaI
XcmI
XhoI
XmaI
ZraI
pFastBac1-EGFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pFastBac1-EGFP once)包括：
NgoMIV
G`CCGG,C
127
BsmBI
CGTCTCN`NNNN,
3182
NaeI
GCC|GGC
129
PflFI
GACN`N,NGTC
3228
BanII
G,RGCY`C
157
Tth111I
BsaHI
GR`CG,YC
836
BbsI
GAAGACNN`NNNN,
3757
PvuI
CG,AT`CG
1005
SnaBI
TAC|GTA
3881
FspI
TGC|GCA
1153
AccI
GT`MK,AC
3883
AlwNI
CAG,NNN`CTG
1852
BstZ17I
GTA|TAC
3884
BseYI
C`CCAG,C
1960
BsmFI
GGGAC(N)10`NNNN,
4000
TfiI
G`AWT,C
2290
BamHI
G`GATC,C
4032
SapI
GCTCTTCN`NNN,
2381
NcoI
C`CATG,G
4036
BspQI
A`AGCT,T
4758
MscI
TGG|CCA
2709
MfeI
C`AATT,G
4873
BstXI
CCAN,NNNN`NTGG
2713
HpaI
GTT|AAC
4886
SacII
CC,GC`GG
2766
BclI
T`GATC,
5022
BaeI
,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5`
2798
AvrII
C`CTAG,G
5037
EcoRV
GAT,ATC
2825
pFastBac1-EGFP的全序列信息请参考的网站上该质粒的信息。 pFastBac1-EGFP质粒使用研发的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞的效果参考图1。
关于昆虫细胞系统的蛋白表达与纯化的详细介绍。 包装清单：
包装
—
说明书
1份
保存条件： -20℃保存。 注意事项： 本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。 本产品**于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或**，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。