pET-Dual-N-GST
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XY2931
1μg
888.00元
pET-Dual-N-GST是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒，其中一种蛋白可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)。本质粒包含两个多克隆位点(MCS)，每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点 (rbs)，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。 在共表达两个蛋白的复合物时，通常宜把较难表达的基因克隆到**个多克隆位点，并在其N端引物设计时加入PreScission蛋白酶识别的八肽序列(LEVLFQGP)，宜把较易表达的基因克隆到**个多克隆位点。这样通过GST柱纯化，可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物，配合使用生产的PreScission Protease (XY2302/XY2303) 4℃酶切过夜，**天收集穿柱液即可获得蛋白复合物，这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然，本质粒也可以只在**个多克隆位点插入目的基因，这样就会仅表达一个含有N端GST标签的目的蛋白。 pET-Dual-N-GST质粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
T7 transcription start-1
1
GST-taq coding sequence
71-727
Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI)
730-780
T7 promoter-2
838-854
T7 transcription start-2
855
Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI)
922-983
S Tag coding sequence
990-1034
T7 terminator
1086-1133
f1 origin
1171-1618
bla(Ap) coding sequence
1743-2600
pBR322 origin
3361
lacI coding sequence
4555-5637
T7 promoter-1
6028-6044
pET-Dual-N-GST质粒(6044bp)的图谱如下：
pET-Dual-N-GST的多克隆位点的详细图谱如下：
Lacoperator
GGGGAATTGT GAGCGGATAA CAATTCCCCT CTAGAAATAA TTTTGTTTAA
CCCCTTAACA CTCGCCTATT GTTAAGGGGA GATCTTTATT AAAACAAATT
rbsGST
51
CTTTAAGAAG GAGATATACC ATGGGCTCCC CTATACTAGG TTATTGGAAA
GAAATTCTTC CTCTATATGG TACCCGAGGG GATATGATCC AATAACCTTT
101
ATTAAGGGCC TTGTGCAACC CACTCGACTT CTTTTGGAAT ATCTTGAAGA
TAATTCCCGG AACACGTTGG GTGAGCTGAA GAAAACCTTA TAGAACTTCT
151
AAAATATGAA GAGCATTTGT ATGAGCGCGA TGAAGGTGAT AAATGGCGAA
TTTTATACTT CTCGTAAACA TACTCGCGCT ACTTCCACTA TTTACCGCTT
201
ACAAAAAGTT TGAATTGGGT TTGGAGTTTC CCAATCTTCC TTATTATATT
TGTTTTTCAA ACTTAACCCA AACCTCAAAG GGTTAGAAGG AATAATATAA
251
GATGGTGATG TTAAATTAAC ACAGTCTATG GCCATCATAC GTTATATAGC
CTACCACTAC AATTTAATTG TGTCAGATAC CGGTAGTATG CAATATATCG
301
TGACAAGCAC AACATGTTGG GTGGTTGTCC AAAAGAGCGT GCAGAGATTT
ACTGTTCGTG TTGTACAACC CACCAACAGG TTTTCTCGCA CGTCTCTAAA
351
CAATGCTTGA AGGAGCGGTT TTGGATATTA GATACGGTGT TTCGAGAATT
GTTACGAACT TCCTCGCCAA AACCTATAAT CTATGCCACA AAGCTCTTAA
401
GCATATAGTA AAGACTTTGA AACTCTCAAA GTTGATTTTC TTAGCAAGCT
CGTATATCAT TTCTGAAACT TTGAGAGTTT CAACTAAAAG AATCGTTCGA
451
ACCTGAAATG CTGAAAATGT TCGAAGATCG TTTATGTCAT AAAACATATT
TGGACTTTAC GACTTTTACA AGCTTCTAGC AAATACAGTA TTTTGTATAA
501
TAAATGGTGA TCATGTAACC CATCCTGACT TCATGTTGTA TGACGCTCTT
ATTTACCACT AGTACATTGG GTAGGACTGA AGTACAACAT ACTGCGAGAA
551
GATGTTGTTT TATACATGGA CCCAATGTGC CTGGATGCGT TCCCAAAATT
CTACAACAAA ATATGTACCT GGGTTACACG GACCTACGCA AGGGTTTTAA
601
AGTTTGTTTT AAAAAACGTA TTGAAGCTAT CCCACAAATT GATAAGTACT
TCAAACAAAA TTTTTTGCAT AACTTCGATA GGGTGTTTAA CTATTCATGA
651
TGAAATCCAG CAAGTATATA GCATGGCCTT TGCAGGGCTG GCAAGCCACG
ACTTTAGGTC GTTCATATAT CGTACCGGAA ACGTCCCGAC CGTTCGGTGC
BamHIEcoRISacIAscI
701
TTTGGTGGTG GCGACCATCC TCCAAAACAG GATCCGAATT CGAGCTCGGC
AAACCACCAC CGCTGGTAGG AGGTTTTGTC CTAGGCTTAA GCTCGAGCCG
NotI
PstISalIHindIII
751
GCGCCTGCAG GTCGACAAGC TTGCGGCCGC ATAATGCTTA AGTCGAACAG
CGCGGACGTC CAGCTGTTCG AACGCCGGCG TATTACGAAT TCAGCTTGTC
T7 promoter2
801
AAAGTAATCG TATTGTACAC GGCCGCATAA TCGAAATTAA TACGACTCAC
TTTCATTAGC ATAACATGTG CCGGCGTATT AGCTTTAATT ATGCTGAGTG
T7 transcription-2→
Lac operator
851
TATAGGGGAA TTGTGAGCGG ATAACAATTC CCCATCTTAG TATATTAGTT
ATATCCCCTT AACACTCGCC TATTGTTAAG GGGTAGAATC ATATAATCAA
rbsNdeIBglIIMunIEcoRVFseI
901
AAGTATAAGA AGGAGATATA CATATGGCAG ATCTCAATTG GATATCGGCC
TTCATATTCT TCCTCTATAT GTATACCGTC TAGAGTTAAC CTATAGCCGG
AatIIKpnI XhoI
951
GGCCACGCGA TCGCTGACGT CGGTACCCTC GAGTCTGGTA AAGAAACCGC
CCGGTGCGCT AGCGACTGCA GCCATGGGAG CTCAGACCAT TTCTTTGGCG
pET-Dual-N-GST中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST)包括：
AgeI
AleI
BbvCI
BmgBI
BmtI
BseRI
BsiWI
BsmI
Bsu36I
CspCI
NheI
NruI
NsiI
PmeI
PmlI
PspAI
RsrII
SacII
SexAI
SfiI
SmaI
SnaBI
SpeI
SrfI
StuI
TspMI
XmaI
pET-Dual-N-GST中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST once)包括：
XbaI
T`CTAG,A
30
AvaI
C`YCGR,G
978
NcoI
C`CATG,G
69
PaeR7I
C`TCGA,G
MscI
TGG|CCA
281
XhoI
BstBI
TT`CG,AA
471
AvrII
C`CTAG,G
1057
SwaI
ATTT|AAAT
BlpI
GC`TNA,GC
1075
BamHI
G`GATC,C
730
DraIII
CAC,NNN`GTG
1404
EcoRI
G`AATT,C
736
PsiI
TTA|TAA
1528
Eco53kI
GAG|CTC
744
SspI
AAT|ATT
1608
SacI
G,AGCT`C
742
AhdI
GACNN,N`NNGTC
1812
BfuAI
ACCTGCNNNN`NNNN,
748
BsaI
GGTCTCN`NNNN,
1874
BspMI
BglI
GCCN,NNN`NGGC
1930
AscI
GG`CGCG,CC
749
FspI
TGC|GCA
2035
PstI
C,TGCA`G
755
AlwNI
CAG,NNN`CTG
3006
SalI
G`TCGA,C
761
BstZ17I
GTA|TAC
3651
HindIII
A`AGCT,T
767
Tth111I
GACN`N,NGTC
3676
GC`GGCC,GC
774
PflFI
AflII
C`TTAA,G
787
Bpu10I
CC`TNA,GC
4313
BsrGI
T`GTAC,A
814
PpuMI
RG`GWC,CY
4413
NdeI
CA`TA,TG
922
HpaI
GTT|AAC
4780
BglII
A`GATC,T
929
PspoMI
G`GGCC,C
5075
MunI
C`AATT,G
935
ApaI
G,GGCC`C
EcoRV
GAT|ATC
943
BstEII
G`GTNAC,C
5100
FseI
GG,CCGG`CC
948
MluI
A`CGCG,T
5282
AsiSI
GCG,AT`CGC
959
BstAPI
GCAN,NNN`NTGC
5603
ZraI
GAC|GTC
968
SphI
G,CATG`C
5811
AatII
G,ACGT`C
966
SgrAI
CR`CCGG,YG
5963
Acc65I
G`GTAC,C
972
BspDI
AT`CG,AT
6007
KpnI
G,GTAC`C
ClaI
PspXI
VC`TCGA,GB
pET-Dual-N-GST质粒中推荐使用的测序引物序列如下： MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′ MCS1-C Primer (832-813): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′ MCS2-N Primer (813-832): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′ T7 terminator Primer (1072-1090): 5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′ pET-Dual-N-GST的全序列信息：XY2931 pET-Dual-N-GST.txt。 包装清单：
包装
—
说明书
1份
保存条件： -20℃保存。 注意事项： 本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。 本产品**于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或**，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。