pET-Dual-N-GST-PreScission
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XY2933
1μg
888.00元
pET-Dual-N-GST-PreScission是一种用于在大肠杆菌中高效共表达两种目的蛋白的质粒，其中一种可以带上GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)并且GST标签后有PreScission蛋白酶的酶切位点。本质粒包含两个多克隆位点(MCS)，每个多克隆位点前都有一个T7启动子/lac操作子和一个核糖体结合位点 (rbs)，因此都可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白的表达。本质粒为氨苄青霉素抗性。 在共表达两个蛋白的复合物时，通常宜把较难表达的基因克隆到**个多克隆位点，宜把较易表达的基因克隆到**个多克隆位点。这样通过GST柱纯化，可分离纯化获得带有GST标签的蛋白复合物。本质粒的N端GST标签与**个多克隆位点之间有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP，对应核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，配合使用生产的PreScission Protease (XY2302/XY2303) 4℃酶切过夜，**天收集穿柱液即可获得蛋白复合物，这为后续进行蛋白复合物的功能检测、蛋白结晶等工作带来了极大的便利。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。当然，本质粒也可以只在**个多克隆位点插入目的基因，这样就会仅表达一个含有N端GST标签和PreScission识别位点的目的蛋白。 pET-Dual-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
T7 transcription start-1
1
GST-taq coding sequence
71-727
PreScission Protease recognation site sequence
728-751
Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI)
752-802
T7 promoter-2
859-875
T7 transcription start-2
876
Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI)
943-1004
S Tag coding sequence
1011-1055
T7 terminator
1107-1154
f1 origin
1192-1639
bla(Ap) coding sequence
1764-2621
pBR322 origin
3382
lacI coding sequence
4576-5658
T7 promoter-1
6049-6065
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒(6065bp)的图谱如下：
pET-Dual-N-GST的多克隆位点的详细图谱如下：
Lacoperator
GGGGAATTGT GAGCGGATAA CAATTCCCCT CTAGAAATAA TTTTGTTTAA
CCCCTTAACA CTCGCCTATT GTTAAGGGGA GATCTTTATT AAAACAAATT
rbsGST
51
CTTTAAGAAG GAGATATACC ATGGGCTCCC CTATACTAGG TTATTGGAAA
GAAATTCTTC CTCTATATGG TACCCGAGGG GATATGATCC AATAACCTTT
101
ATTAAGGGCC TTGTGCAACC CACTCGACTT CTTTTGGAAT ATCTTGAAGA
TAATTCCCGG AACACGTTGG GTGAGCTGAA GAAAACCTTA TAGAACTTCT
151
AAAATATGAA GAGCATTTGT ATGAGCGCGA TGAAGGTGAT AAATGGCGAA
TTTTATACTT CTCGTAAACA TACTCGCGCT ACTTCCACTA TTTACCGCTT
201
ACAAAAAGTT TGAATTGGGT TTGGAGTTTC CCAATCTTCC TTATTATATT
TGTTTTTCAA ACTTAACCCA AACCTCAAAG GGTTAGAAGG AATAATATAA
251
GATGGTGATG TTAAATTAAC ACAGTCTATG GCCATCATAC GTTATATAGC
CTACCACTAC AATTTAATTG TGTCAGATAC CGGTAGTATG CAATATATCG
301
TGACAAGCAC AACATGTTGG GTGGTTGTCC AAAAGAGCGT GCAGAGATTT
ACTGTTCGTG TTGTACAACC CACCAACAGG TTTTCTCGCA CGTCTCTAAA
351
CAATGCTTGA AGGAGCGGTT TTGGATATTA GATACGGTGT TTCGAGAATT
GTTACGAACT TCCTCGCCAA AACCTATAAT CTATGCCACA AAGCTCTTAA
401
GCATATAGTA AAGACTTTGA AACTCTCAAA GTTGATTTTC TTAGCAAGCT
CGTATATCAT TTCTGAAACT TTGAGAGTTT CAACTAAAAG AATCGTTCGA
451
ACCTGAAATG CTGAAAATGT TCGAAGATCG TTTATGTCAT AAAACATATT
TGGACTTTAC GACTTTTACA AGCTTCTAGC AAATACAGTA TTTTGTATAA
501
TAAATGGTGA TCATGTAACC CATCCTGACT TCATGTTGTA TGACGCTCTT
ATTTACCACT AGTACATTGG GTAGGACTGA AGTACAACAT ACTGCGAGAA
551
GATGTTGTTT TATACATGGA CCCAATGTGC CTGGATGCGT TCCCAAAATT
CTACAACAAA ATATGTACCT GGGTTACACG GACCTACGCA AGGGTTTTAA
601
AGTTTGTTTT AAAAAACGTA TTGAAGCTAT CCCACAAATT GATAAGTACT
TCAAACAAAA TTTTTTGCAT AACTTCGATA GGGTGTTTAA CTATTCATGA
651
TGAAATCCAG CAAGTATATA GCATGGCCTT TGCAGGGCTG GCAAGCCACG
ACTTTAGGTC GTTCATATAT CGTACCGGAA ACGTCCCGAC CGTTCGGTGC
PreScission
↓
701
TTTGGTGGTG GCGACCATCC TCCAAAACTG GAAGTTCTGT TCCAGGGGCC
AAACCACCAC CGCTGGTAGG AGGTTTTGAC CTTCAAGACA AGGTCCCCGG
NotI
BamHIEcoRISacIAscIPstISalIHindIII
751
CGGATCCGAA TTCGAGCTCG GCGCGCCTGC AGGTCGACAA GCTTGCGGCC
GCCTAGGCTT AAGCTCGAGC CGCGCGGACG TCCAGCTGTT CGAACGCCGG
801
GCTAATGCTT AAGTCGAACA GAAAGTAATC GTATTGTACA CGGCCGCATA
CGATTACGAA TTCAGCTTGT CTTTCATTAG CATAACATGT GCCGGCGTAT
T7transcription-2→
T7promoter2
851
ATCGAAATTA ATACGACTCA CTATAGGGGA ATTGTGAGCG GATAACAATT
TAGCTTTAAT TATGCTGAGT GATATCCCCT TAACACTCGC CTATTGTTAA
rbsNdeIBglII
901
CCCCATCTTA GTATATTAGT TAAGTATAAG AAGGAGATAT ACATATGGCA
GGGGTAGAAT CATATAATCA ATTCATATTC TTCCTCTATA TGTATACCGT
MunIEcoRVFseIAatIIKpnIXhoI
951
GATCTCAATT GGATATCGGC CGGCCACGCG ATCGCTGACG TCGGTACCCT
CTAGAGTTAA CCTATAGCCG GCCGGTGCGC TAGCGACTGC AGCCATGGGA
pET-Dual-N-GST-PreScission中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST-PreScission)包括：
AgeI
AleI
BbvCI
BmgBI
BmtI
BseRI
BsiWI
BsmI
Bsu36I
CspCI
NheI
NruI
NsiI
PmeI
PmlI
PspAI
RsrII
SacII
SexAI
SfiI
SmaI
SnaBI
SpeI
SrfI
StuI
TspMI
XmaI
pET-Dual-N-GST-PreScission中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST-PreScission once)包括：
XbaI
T`CTAG,A
30
PspXI
VC`TCGA,GB
999
NcoI
C`CATG,G
69
AvaI
C`YCGR,G
MscI
TGG|CCA
281
BsoBI
BstBI
TT`CG,AA
471
PaeR7I
C`TCGA,G
SwaI
ATTT|AAAT
XhoI
BamHI
G`GATC,C
752
PacI
TTA,AT`TAA
1072
EcoRI
G`AATT,C
758
AvrII
C`CTAG,G
1078
Eco53kI
GAG|CTC
766
BlpI
GC`TNA,GC
1096
SacI
G,AGCT`C
764
DraIII
CAC,NNN`GTG
1421
BfuAI
ACCTGCNNNN`NNNN,
770
PsiI
TTA|TAA
1549
BspMI
SspI
AAT|ATT
1629
AscI
GG`CGCG,CC
771
AhdI
GACNN,N`NNGTC
1833
PstI
C,TGCA`G
777
BsaI
GGTCTCN`NNNN,
1895
SbfI
CC,TGCA`GG
BglI
GCCN,NNN`NGGC
1951
SalI
G`TCGA,C
783
FspI
TGC|GCA
2056
HindIII
A`AGCT,T
789
AlwNI
CAG,NNN`CTG
3027
GC`GGCC,GC
796
BstZ17I
GTA|TAC
3672
AflII
C`TTAA,G
808
Tth111I
GACN`N,NGTC
3697
BsrGI
T`GTAC,A
835
PflFI
NdeI
CA`TA,TG
943
Bpu10I
CC`TNA,GC
4334
BglII
A`GATC,T
950
PpuMI
RG`GWC,CY
4434
MfeI
C`AATT,G
956
HpaI
GTT|AAC
4801
EcoRV
GAT|ATC
964
BstEII
G`GTNAC,C
5121
FseI
GG,CCGG`CC
969
MluI
A`CGCG,T
5303
AsiSI
GCG,AT`CGC
980
BstAPI
GCAN,NNN`NTGC
5624
ZraI
GAC|GTC
989
SphI
G,CATG`C
5832
AatII
G,ACGT`C
987
SgrAI
CR`CCGG,YG
5984
Acc65I
G`GTAC,C
993
ClaI
AT`CG,AT
6028
KpnI
G,GTAC`C
BspDI
pET-Dual-N-GST-PreScission质粒中推荐使用的测序引物序列如下： MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′ MCS1-C Primer (853-834): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′ MCS2-N Primer (834-853): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′ T7 terminator Primer (1093-1111): 5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′ pET-Dual-N-GST-PreScission的全序列信息：XY2933 pET-Dual-N-GST-PreScission.txt。 包装清单：
包装
—
说明书
1份
保存条件： -20℃保存。 注意事项： 本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。 本产品**于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或**，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。