PreScission Protease

PreScission Protease

      PreScission Protease是一种大肠杆菌中重组表达的带GST标签的人鼻病毒14型的3C蛋白酶(human rhinovirus (HRV)
type 14 3C protease)，也称HRV 3C Protease或HRV3C Protease，能在低温条件下(4°C)特异性地识别八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或核心五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和Gly氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione S-transferase (GST)、His或者其它标签的蛋白酶。
      建议把GST或His等标签设计在融合蛋白的N端，在GST或His等标签与目的蛋白之间设计加入PreScission Protease 专一性识别与酶切的上述八肽序列，这样在GST或His标签被酶切后，在目的蛋白的N端仅有两个额外的Gly-Pro氨基酸残基，从而*大限度地减少了对其结构和功能的影响。
      本PreScission Protease带有GST标签，特别适合用于GST标签蛋白的在柱酶切。在切割GST标签蛋白的时候，切下的GST标签和PreScission Protease可结合于GST纯化柱(GST-tag Purification Resin)上，而目的蛋白在穿透液中，这样洗脱下来的蛋白中就不会含有GST标签和PreScission Protease，从而极大地方便了目的蛋白的纯化。GST标签酶切去除的详细说明可以参考的XY2251/XY2253/XY2255 BeyoGold™ GST-tag Purification Resin和XY2262 GST标签蛋白纯化试剂盒的说明书。
      酶活性单位定义：5°C反应16小时，能够切割100μg GST标签蛋白达90%以上所需的酶量定义为一个活性单位。
      PreScission Protease酶活性鉴定结果可参考图1。

      图1. PreScission Protease切割GST标签蛋白的效果图。含有PreScission Protease识别位点的56kD GST标签蛋白与PreScission Protease进行反应，底物的用量为100μg，酶的用量依次为0、0.25、0.5、1、2、4U，5°C在1X PreScission
Buffer中反应16小时后取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约30kD的目的蛋白和约26kD的GST标签。

      PreScission Protease分子量大小约46 kDa，纯度≥95%。
      PreScission Protease储存液组成为：50mM Tris-HCl，150mM NaCl，10mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v) glycerol，pH 8.0。
      10X PreScission Buffer组成为：500mM Tris-HCl，1.5M NaCl，10mM EDTA，10mM DTT，pH 7.5。
      PreScission Protease的酶切体系中可以兼容1% Triton X-100、Tween-20或NP-40，10mM EDTA和500mM NaCl。
      本产品一个包装含有500单位的酶，可用于约50mg带有PreScission Protease识别位点的融合蛋白的切割。
包装清单：

保存条件：
      -20℃保存。
注意事项：
      100mM ZnCl₂、4mM AEBSF和100μM Chymostatin会抑制PreScission Protease的酶活性50%以上。
      本产品**于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或**，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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