新闻详情
质粒的提取 (Tiangen质粒提取试剂盒)过程
日期：2024-11-22 11:30
浏览次数：163
摘要：
质粒的提取 (Tiangen质粒提取试剂盒)过程：
1、挑菌： 选取培养板中大小中等的单个菌落， 消du牙签接种到10ml摇菌管中， 其中含有卡那-霉素的LB约5ml， 37 °C， 220rpm恒温摇床中震荡培养过夜。
2、取上述2.0ml培养液， 于常温下12000 rpm离心1分钟， 弃上清， 干燥沉淀。
3、 加入250ul溶液P1(配有去RNA酶， 4 °C保存)， 涡旋振荡， 完全悬浮xi 菌，不能留有沉淀， 否则会影响裂解。
4、加入250ul...
质粒的提取 (Tiangen质粒提取试剂盒)过程：
1、挑菌： 选取培养板中大小中等的单个菌落， 消du牙签接种到10ml摇菌管中， 其中含有卡那-霉素的LB约5ml， 37 °C， 220rpm恒温摇床中震荡培养过夜。
2、取上述2.0ml培养液， 于常温下12000 rpm离心1分钟， 弃上清， 干燥沉淀。
3、 加入250ul溶液P1(配有去RNA酶， 4 °C保存)， 涡旋振荡， 完全悬浮xi 菌，不能留有沉淀， 否则会影响裂解。
4、加入250ul溶液P2， 快速上下颠倒8次， 常温静置3分钟， 可见混合液逐渐变清、 粘稠， 表示已充分裂解。
5、再加入350 ul溶液Ⅲ， 快速上下颠倒8次， 可见白色絮状物出现。
6、 常温12000rpm离心10分钟， 所得上清液倒入已经用BL平衡过的过滤柱中，注意不要倒入白色絮状物沉淀， 静置3分钟， 12000 rpm离心1分钟。
7、 加入500ul溶液PD， 12000 rpm离心1分钟。
8、 加入600 ul溶液PW， 12000 rpm离心1分钟； 此步骤再重复1次； 弃废液后空管再次12000 rpm离心2分钟。
9、于超净台通风干燥， 放置2-5分钟， 加入33ul已加热至65 °C的已灭jun 的ddH 2 O， 室温静置3分钟， 12000 rpm离心2分钟， 得到相关质粒DNA， 测浓度， -20 °C保存备用。