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ELISA试剂盒检测未知抗原的双抗体夹心法过程
日期：2025-01-08 22:26
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摘要：
这种形式需要使用特定于该抗原不同表位的两种不同抗体。这两种抗体通常被称为匹配抗体对。其中一种抗体包被于多孔板表面上并用作捕获抗体以促进抗原的固定，另一种抗体被酶偶联并促进抗原的检测。ELISA试剂盒检测未知抗原的双抗体夹心法过程：
1、包被：用包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/mL。向每个Elisa板孔中加入0.1mL，4℃过夜孵育。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
2、封闭：分别向各板孔中加入0.1mL的封闭液，37℃孵育1h，洗涤
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这种形式需要使用特定于该抗原不同表位的两种不同抗体。这两种抗体通常被称为匹配抗体对。其中一种抗体包被于多孔板表面上并用作捕获抗体以促进抗原的固定，另一种抗体被酶偶联并促进抗原的检测。ELISA试剂盒检测未知抗原的双抗体夹心法过程：
1、包被：用包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/mL。向每个Elisa板孔中加入0.1mL，4℃过夜孵育。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
2、封闭：分别向各板孔中加入0.1mL的封闭液，37℃孵育1h，洗涤
3、加样：分别加用稀释液稀释一定倍数的待检样品0.1mL和梯度稀释后的抗原标准品0.1mL于上述已包被好的反应孔中，置37℃孵育1小时，洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
4、加酶标抗体：于各反应孔中，加入0.1mL新鲜稀释的酶标抗体(酶标抗体的稀释倍数需提前优化测定)。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
5、加底物液显色：于各反应孔中加入0.1mL新鲜配制的TMB底物溶液，37℃避光反应10～30min。
6、终止反应：于各反应孔中加入50uL的2M硫酸。
7、结果判定：将Elisa板置于酶标仪上，于450nm处读取各空的OD值，各孔分别减去空白对照孔的OD值进行调零，根据标准样品制作标准曲线，再分别计算各样品的抗原含量。