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PCR工作步骤
日期：2024-11-22 02:10
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摘要：
需要自备的器材：
1．方法仪器：分析天平、离心机、荧光PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的mie菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、mie菌双蒸水。
样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（z...
需要自备的器材：
1．方法仪器：分析天平、离心机、荧光PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：荧光PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸二乙酯（DEPC）水
处理的mie菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、mie菌双蒸水。
样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（zui多冻融3次）；
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
工作步骤:
标准的PCR过程分为三步：
1. DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA
2. 退火（复性）（40℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
3. 延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右*佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。
现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是*佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度