50T禽流感病毒N9亚型PCR检测试剂盒上海博湖生物科技有限公司

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产品名称：50T禽流感病毒N9亚型PCR检测试剂盒
产品型号：BH-P63258
产品厂商：博湖
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简单介绍：

50T禽流感病毒N9亚型PCR检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。

详情介绍：

它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

产品名称	规格	货号
50T禽流感病毒N9亚型PCR检测试剂盒	50T	BH-P63258

实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶（2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（*好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。

注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
晚期氧化蛋白产物(AOPP)ELISA试剂盒 AOPP ELISA Kit 细胞酪氨酸转氨酶抗体英文名称：ATTY 0.2ml

晚期糖基化终末产物受体(RAGE/AGER)ELISA试剂盒 RAGE/AGER ELISA Kit 抗**/血管升压素/加压素/血管加压素抗体英文名称：Vasopressin 0.1ml

晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA试剂盒 AGEs ELISA Kit ATP结合盒蛋白家族GCN20F家族1抗体英文名称：ABCF1 0.1ml

外显肽(extein)ELISA试剂盒 extein ELISA Kit 醛糖还原酶抗体英文名称：AKR1B1 0.2ml

蛙皮素(BBS)ELISA试剂盒 BBS ELISA Kit 人血清白蛋白抗体英文名称：Serum albumin 0.1ml

唾液酸(SA)ELISA试剂盒 SA ELISA Kit 炭疽菌抗体（采用活疫苗制备）英文名称：Anthrax 0.2ml

唾液过氧化物酶(SP)ELISA试剂盒 SP ELISA Kit 活化转录因子4抗体英文名称：ATF4 0.1ml

拓朴异构酶Ⅱ(TopoⅡ)ELISA试剂盒 TopoⅡ ELISA Kit 腺苷酸激酶-1抗体英文名称：Adenylate Kinase 1 0.2ml

脱氧皮质酮(DOC)ELISA试剂盒 DOC ELISA Kit 纤维状肌动蛋白抗体英文名称：F-Actin 0.1ml

脱氧尿三磷酸(DUTP)ELISA试剂盒 DUTP ELISA Kit 聚集蛋白抗体英文名称：Agrin 0.1ml

脱氧胶原吡啶交联(DPD)ELISA试剂盒 DPD ELISA Kit 调亡诱导因子抗体英文名称：AIF 0.1ml

脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA试剂盒 DNase-Ⅰ ELISA Kit 调亡诱导因子抗体英文名称：AIF 0.1ml

脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒 DPD ELISA Kit 间变型瘤激酶抗体英文名称：ALK 0.2ml