产品名称：50T大肠杆菌溶血素基因（HLY）PCR检测试剂盒

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。

实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（*好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
C4结合蛋白(C4BP)ELISA试剂盒  C4BP ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白51抗体英文名称：CCDC51 0.2ml

C1q/TNF相关蛋白3(Cartonectin/CTRP3/CORS-26)ELISA试剂盒  Cartonectin/CTRP3/CORS-26 ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白125抗体英文名称：CCDC125 0.2ml

B因子(BF)ELISA试剂盒  BF ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白50抗体英文名称：CCDC50 0.1ml

B细胞受体相关蛋白31(BCAP31)ELISA试剂盒  BCAP31 ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白90A抗体英文名称：CCDC90A 0.2ml

B细胞受体(BCR)ELISA试剂盒  BCR ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白71抗体英文名称：CCDC71 0.1ml

B细胞生长因子(BCGF)ELISA试剂盒  BCGF ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白37抗体英文名称：CCDC37 0.2ml

B细胞瘤因子6(Bcl6)ELISA试剂盒  Bcl6 ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白47抗体英文名称：CCDC47 0.2ml

B细胞瘤因子3(Bcl3)ELISA试剂盒  Bcl3 ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白17抗体英文名称：CCDC17 0.2ml

B细胞瘤因子2(Bcl-2)ELISA试剂盒  Bcl-2 ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白58抗体英文名称：CCDC58 0.2ml

B细胞瘤-XL(Bcl-xl)ELISA试剂盒  Bcl-xl ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白94抗体英文名称：CCDC94 0.2ml

B细胞连接蛋白(BLNK)ELISA试剂盒  BLNK ELISA Kit  卷曲螺旋结构域蛋白82抗体英文名称：CCDC82 0.2ml

B细胞活化因子受体(BAFF-R)ELISA试剂盒  BAFF-R ELISA Kit  CDK5激活结合蛋白2抗体英文名称：CDK5RAP2 0.2ml

B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒  BAFF ELISA Kit  CDK2相互作用蛋白抗体英文名称：CINP 0.2ml

B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(NFKBIE)ELISA试剂盒  NFKBIE ELISA Kit  癌胚抗原相关细胞粘附分子19抗体英文名称：CEACAM19 0.2ml

B细胞分化因子(BCDF)ELISA试剂盒  BCDF ELISA Kit  周期蛋白依赖性激酶14抗体英文名称：CDK14 0.2ml

50T大肠杆菌溶血素基因（HLY）PCR检测试剂盒100次 免DNA提取PCR试剂盒 Cell Lysate PCR Mix -20℃保存

100次 即用型易错PCR试剂盒 Instant Error-Prone PCR Kit -20℃保存

10次 DNA Shuffing试剂盒 DNA Shuffling Kit -20℃保存

20次 即用型长片段PCR试剂盒 Instant Long PCR Mix -20℃保存

1.5mL 即用型高保真PCR试剂盒 Instant HiFi PCR Mix -20℃保存

9mL 即用型高保真PCR试剂盒 Instant HiFi PCR Mix -20℃保存

50次 即用型多重 PCR试剂盒 Multiplex PCR Marster Mix -20℃保存

100次 即用型荧光定量PCR试剂盒 Instant Fluorescent qPCR Kit -20℃保存

600次 即用型荧光定量PCR试剂盒 Instant Fluorescent qPCR Kit -20℃保存

1mL Real-Time PCR稀释液 Diluent for Real-Time PCR  -20℃保存

200uL ROX参考染料 ROX Reference Dye 4℃或-20℃避光保存

5ug ROX参考染料II ROX Reference Dye II  4℃或-20℃避光保存

10次 cDNA链合成试剂盒 1st-Strand cDNA Synthesis Kit -20℃保存

注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。