它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
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产品名称 |
规格 |
货号 |
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50T登革热病毒4型(DFV-IV)PCR检测试剂盒 |
50T |
BH-P64082 |
实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（*好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
磷酸烯醇丙酮酸羧激酶抗体英文名称：PCK1 0.2ml
多聚合酶α抗体英文名称：PAPOA 0.2ml
多聚合酶g抗体英文名称：PAPOG 0.2ml
神经内肽QRFP抗体英文名称：QRFP 0.2ml
巯基氧化酶1抗体英文名称：Quiescin Q6 0.2ml
喹啉酸磷酸核糖基转移酶抗体英文名称：QPRT/QAPRTase 0.2ml
RNA结合蛋白QK1抗体英文名称：QK1 0.1ml
维甲酸诱导蛋白3抗体英文名称：RAI3 0.2ml
Rap鸟嘌呤核苷酸交换因子2抗体英文名称：RAPGEF2 0.2ml
Rap鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)5抗体英文名称：RAPGEF5/Repac 0.2ml
Rho家族GTP酶2抗体英文名称：RND2/Rho7 0.2ml
受体辅助蛋白1抗体英文名称：REEP1 0.2ml
环指蛋白135抗体英文名称：RNF135 0.2ml
RAS相关蛋白Rab5B抗体英文名称：Rab5b 0.2ml
环指蛋白146抗体英文名称：RNF146 0.2ml
50T登革热病毒4型(DFV-IV)PCR检测试剂盒LB肉汤颗粒 LB Broth 300ml/袋*10
改良马丁琼脂培养基颗粒 Martin Agar Medium, Modified 250g
胰蛋白胨大豆肉汤颗粒 Tryptose Soya Broth 250g
胰蛋白胨大豆琼脂颗粒 TSA Agar 250g
脑心浸出液肉汤（BHI）颗粒 BHI Broth 250g
大豆酪蛋白消化物培养基（USP）颗粒 Soybean Casein Digest Medium 250g
10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤颗粒 10% NaCl Trypticase Soy Broth 250g
麦康凯液体培养基（颗粒） 250g
紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（颗粒） 250g
显色培养基
MUG培养基 MUG Medium 100g
茜素-β-半乳糖苷琼脂(Aliz-gal琼脂) Aliz-gal Agar 100g
大肠杆显色培养基 E.Coli Chromogenic Medium 1000(ML)
