细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代。
英文名称
NCI-H889 [H889]
产品形态
上皮细胞样 悬浮生长
货号
P-X9126
产品分类
人
规格
1×106
包装
株
来源
肺
用途
仅供科研研究使用
产品详情:
种属来源;人
性别年龄;女性
组织来源;肺
生长特性;悬浮生长
细胞形态;上皮细胞样
细胞规格;1 X 106cells/T25或1 mL冻存管
培养条件;RPMI 1640 + 10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2
冻存条件;90% FBS + 10% DMSO
传代方法;1:3传代, 2-3天传1代
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏::将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理:
公司正在出售的产品:
有丝分裂抑制缺陷蛋白1抗体 |
载玻片细胞INSULIN 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 |
MAD1 |
兔胶原吡啶交联(PYD)elisa分析检测试剂盒 |
细胞分化相关蛋白13抗体 |
血液琼脂平板 |
DAP13 |
大鼠前列腺素D合成酶(PGDS)elisa检测试剂盒 |
T细胞受体α抗体 Anti-TCR alpha |
鱼肾上腺素(EPI)elisa检测试剂盒 |
环指蛋白146抗体 Anti-RNF146 |
线粒体核糖体蛋白S27抗体 MRPS27 |
硫酸软骨素蛋白多糖4/黑色素瘤相关蛋白抗体 Anti-NG2/CSPG4 |
小脑肽2抗体 CBLN2 |
等电压依赖性阴离子通道抗体 Anti-VDAC |
巴尔得-别德尔综合征相关蛋白4抗体 BBS4 |
磷酸化Smad2抗体 phospho-Smad2 (Ser465) |
半胱氨酸蛋白酶8单克隆抗体 Caspase 8 |
周期素依赖性激酶5激活结合蛋白C53抗体 CDK5RAP3 |
CD2F-10抗体 SLAMF9 |
转录下调蛋白1抗体 DR1 protein |
CoREST3蛋白抗体 CoREST3 |
骨/软骨蛋白多糖1抗体 Biglycan |
磷酸化3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1抗体 Phospho-PDPK1 (Tyr373 + Tyr376) |
含R3H结构域蛋白R3HDM2抗体 R3HDM2 |
NDUFS5蛋白抗体 NDUFS5 |
MOGT1蛋白抗体 MOGT1 |
NCI-H889 [H889] 人小细胞肺癌细胞溶质载体家族25成员48抗体 slc25a48 |
神经生长相关蛋白SCG10抗体 STMN2 |
体液肌酸激酶(CK)总活性比色法定量检测试剂盒 |
人存活素抗体/生存蛋白(Surv)elisa检测试剂盒 |
小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)elisa检测试剂盒 |
实验步骤:
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上,利用293T细胞进行慢病毒包装,获得含目的基因的慢病毒;
2 转染前24 h进行细胞铺板,转染时细胞密度控制在80%左右;
3 天加入适量病毒悬液感染细胞,并置于37 ℃,5% CO2培养箱中孵育;
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基,并继续培养;
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养,直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%,获得稳转细胞系。