细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代。
英文简称
规格
货号
Hs 729 (Hs 729.T
1×106
P-X9561
产品详情:
种属来源;人
性别年龄;男性,74岁
组织来源;肌肉
生长特性;贴壁生长
细胞形态;成纤维细胞
细胞规格;1 X 106cells/T25或1 mL冻存管
培养条件;DMEM + 10% fetal bovine serum (FBS)37 ℃, 5% CO2
冻存条件;90% FBS + 10% DMSO
传代方法;1:3传代, 2-3天传1代
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏::将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理:
公司正在出售的产品:
原钙粘附蛋白β1抗体 |
大鼠含球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)elisa分析检测试剂盒 |
PCDHB1 |
冰冻切片结缔组织(CONNECTIVE TISSUE)格莫瑞(Gomori)染色试剂盒 |
同源相互作用蛋白激酶4抗体 |
昆虫膜蛋白提取试剂盒50T |
HIPK4 |
小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)elisa检测试剂盒免费代测 |
神经突触相关蛋白SLITRK6抗体 Anti-SLITRK6 |
酰基转移酶(AAT)测试盒 |
锌指蛋白754抗体 Anti-Rex1/Zinc finger protein 754 |
纤维母细胞生长因子4抗体 FGF4 |
神经毒性因子ICP34.5(人单纯疱疹Ⅰ型)抗体 Anti-HSV 1 |
线粒体苹果酸脱氢酶2抗体 MDH2 |
锌指蛋白BED5抗体 Anti-ZBED5 |
γ干扰素诱导蛋白202抗体 IFI202 |
磷酸化CREB转录共激 Phospho-CRTC1 (Ser151) |
白介素17受体抗体 IL17RA |
肿瘤坏死因子受体相互作用蛋白抗体 TRIP |
BRD3蛋白抗体 BRD3 |
轴突蛋白3 beta抗体 Neurexin-3-beta |
CD39重组兔单克隆抗体 CD39/ENTPD1 |
睾丸特异丝氨酸/苏氨酸激酶6抗体 TSSK6 |
离子型谷氨酸受体4抗体 GLUR4 |
骨形态发生蛋白4抗体 BMP4 |
MS4A4E蛋白抗体 MS4A4E |
L型氨基酸转运蛋白2抗体 LAT2 |
Hs 729 (Hs 729.T 人横纹肌肉瘤细胞人瘤病毒18型E4抗体 HPV18 E4 |
软骨相关蛋白CRTAP抗体 CRTAP |
大鼠整合素αM型((ITG αM/CD11b)elisa检测试剂盒 |
冰冻切片组织DAP KINASE蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 |
粪便副伤A(Salmonella Paratyphi A)定性基因检测试剂盒 |
实验步骤:
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上,利用293T细胞进行慢病毒包装,获得含目的基因的慢病毒;
2 转染前24 h进行细胞铺板,转染时细胞密度控制在80%左右;
3 天加入适量病毒悬液感染细胞,并置于37 ℃,5% CO2培养箱中孵育;
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基,并继续培养;
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养,直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%,获得稳转细胞系。