细胞接收后的处理：
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。
小鼠骨肉瘤成骨细胞+LUC;K7M2 WT -GFP-PURO
英文简称
规格
货号
K7M2-WT-COGFP
1×106
P-X11279
产品详情：
细胞别称；K7M2-WT-COGFP；小鼠骨肉瘤成骨细胞-绿色荧光蛋白标记；小鼠骨肉瘤成骨细胞-GFP
种属来源；小鼠
组织来源；骨肉瘤
生长特性；贴壁生长
细胞形态；成骨细胞样
背景简介；Luciferase K7M2 wt细胞稳定表达绿色荧光蛋白标记。该细胞株性状稳定，培养时不需要添加维持。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带GFP基因。K7M2 wt [K7M2-WT]细胞抗原表达：Ⅷ因子、整合唾液酸蛋白(BSP)、二聚糖、饰胶蛋白聚糖、绒毛蛋白。此外，骨唾液酸蛋白、二聚糖、饰胶蛋白聚糖和骨调素的表达显示K7M2 wt [K7M2-WT]细胞骨家族细胞特性。
生物等级；1
细胞规格；1x106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测；无
保藏机构；ATCC; CRL-2836
培养基；89%DMEM+10%FBS+1%PS+4.0ug/ml puro
培养条件；气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件；无血清冻存液，液氮储存
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理：
公司正在出售的产品：
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脑瘤相关基因抗体 |
小鼠8异前列腺素(8-iso-PG)elisa检测试剂盒 |
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Netrin G2 Ligand |
大鼠巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)elisa检测试剂盒 |
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生长分化因子7抗体 |
小鼠维生素B9(VB9)elisa检测试剂盒 |
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GDF7 |
细胞磷酸甲羟戊酸激酶（phosphomevalonate kinase）活性 |
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小鼠P物质受体(SP-R)elisa检测试剂盒 |
人蛋白酶3(PR3)elisa分析检测试剂盒 |
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防脱载玻片经APES处理 50片 |
味觉2型受体蛋白家族49抗体 TAS2R49 |
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细胞NF KAPPA B P65蛋白表达比色法定量检测试剂盒 |
细胞骨架衔接蛋白BIN3抗体 BIN3 |
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马白介素6(IL-6)elisa分析检测试剂盒 |
src原癌基因单克隆抗体 SRC |
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卷曲螺旋结构域蛋白126抗体 CCDC126 |
TRIM43B蛋白抗体 TRIM43B |
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原钙粘蛋白γA1抗体 PCDHGA1 |
AF680标记的上皮细胞粘附分子（CD326）抗体 EpCAM, Alexa Fluor 680 conjugated |
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粘蛋白20抗体 MUC20 |
AF750标记的造血干细胞抗原CD133抗体 CD133, Alexa Fluor 750 conjugated |
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分泌型磷脂酶A2亚基5抗体 Secretory phospholipase A2 Type V |
紧密连接蛋白2单克隆抗体 Claudin 2 |
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富含脯氨酸蛋白18抗体 PRR18 |
HRP标记的人CD34单克隆抗体 CD34, HRP conjugated |
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G蛋白偶联受体γ4抗体 G gamma4 |
小鼠骨肉瘤成骨细胞+LUC;K7M2 WT -GFP-PURO凝血酶原酶/维介素抗体 FGL2 |
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羟乙基淀粉抗体 Hydroxyethyk starch |
小鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)elisa分析检测试剂盒 |
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大鼠促黄体 （LH）elisa检测试剂盒 |
绵羊甲状腺素(T4)elisa分析检测试剂盒 |
实验步骤：
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。
