细胞接收后的处理:
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代。
英文简称
规格
货号
y79
1×106
P-X9322
产品详情:
细胞别称;y79;人视网膜母细胞瘤细胞
种属来源;人
组织来源;视网膜
生长特性;悬浮生长
细胞形态;圆形、成簇细胞样
细胞代数;10代以内
背景简介;1971年1月,该细胞由Reid TW及其同事从病人右眼切除的肿瘤进行原代培养建立而成,此病人有很强的视网膜母细胞瘤的母系家族遗传性。该细胞的超微结构,如核膜内折、三层膜结构、大的被膜小泡、环孔板、微管、中心粒、基粒等都与原始肿瘤相似。
细胞规格;1x106cells/T25或1mL冻存
支原体检测;无
培养基;RPMI-1640+20% FBS+PS
培养条件;气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件;无血清冻存液,液氮储存
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏::将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理:
公司正在出售的产品:
猴可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)elisa生化检测试剂盒 |
腺苷脱氨酶EC 3.5.4.4 1 KU/瓶 |
sICAM-1 ELISA Kit |
药品糖精(saccharin)含量红外光谱法定量检测试剂盒 |
人泛素结合酶E2D1(UBC4/ 5的同源物,酵母)(UBE2D1)elisa生化检测试剂盒 |
豚鼠α干扰素(IFN-α)elisa分析检测试剂盒 |
UBE2D1ELISAkit |
植物培养细胞DNA损伤彗星荧光检测试剂盒 |
豚鼠干扰素γ(IFNγ)elisa检测试剂盒 |
大鼠生长释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)elisa检测试剂盒 |
半胱-3(CASPASE-3) |
通用转录因子3C多肽3/TFIIIC102抗体 GTF3C3/TFIIIC102 |
细胞超氧化物阴离子化学发光法定量检测试剂盒 |
突触素样蛋白1抗体 Pantophysin |
谷氨酰胺合成酶(GS)测试盒 |
RET指蛋白样2/3抗体 RFPL2+RFPL3 |
间充质干细胞蛋白DSC54抗体 PRR16/DSC54 |
S100钙结合蛋白A8单克隆抗体 S100A8 |
胰岛素降解酶单克隆抗体 IDE |
5-羟色胺受体3抗体 5-HTR3 |
乙酰基赖氨酸/乙酰化赖氨酸单克隆抗体 Acetylated Lysine |
9号染色体开放阅读框25抗体 C9orf25 |
多巴胺受体D5抗体 Dopamine D5 receptor |
甲基化多聚腺苷酸结合蛋白抗体 PABP (Methyl Arg455/460) |
翻译延伸因子EF-1a重组兔单克隆抗体 EEF1A1 |
GTP酶IMAP家族成员3抗体 GIMAP3 |
FOXN4蛋白抗体 FOXN4 |
Y-79人视网膜母细胞瘤细胞膜蛋白EVC2抗体 EVC2 |
帕金蛋白抗体 Parkin |
人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)elisa分析检测试剂盒 |
氧化酶定性检测试剂盒 |
大鼠胱天蛋白酶9(CASP9)elisa检测试剂盒 |
实验步骤:
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上,利用293T细胞进行慢病毒包装,获得含目的基因的慢病毒;
2 转染前24 h进行细胞铺板,转染时细胞密度控制在80%左右;
3 天加入适量病毒悬液感染细胞,并置于37 ℃,5% CO2培养箱中孵育;
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基,并继续培养;
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养,直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%,获得稳转细胞系。