服务流程:
(1)客户提供:目的细胞具体信息;
(2)操作过程:细胞复苏培养,细胞发货;
(3)交付内容:细胞系/细胞株,以及细胞使用说明书。
产品名称 |
SV40-MES-13细胞 |
规格 |
详见说明书 |
货号 |
BH-8010802 |
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
实验要点及说明 :
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为玻璃**,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。
3. 静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。
5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。
6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制,
7. 因为细胞培养过程外因太多,所以我们的售后保障期为一周,超过一周的细胞我们会酌情处理,但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
pNH-TrxT (linearized) 小鼠α2纤溶酶抑制物(α2-PI)ELISA Kit
Hamason and lushbangh 法网状纤维染色试剂盒 DNA电泳分子量标准系列(DNA marker)(100-2000bp)
大鼠促肾上皮质释放(CRH)ELISA Kit pRK2013(60908-5911)
Clostridium (rb-9) medium Bis-Tris Buffer,0.2M,pH7.0
pAG416GPD-ECFP-ccdB(pAG416GPDECFPccdB) 大鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA Kit
人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA Kit Manning medium
柱式酱油DNAout(见关联产品) pcDNA3.1/nV5-DEST(pcDNA3.1nV5DEST)
pLVX-MetLuc Control 人雄(ASD)ELISA Kit
脂肪酶 大提无内质粒DNAout
人基质金属蛋白酶基因PCR检测试剂盒 pOM8
YRp8phocat Golgi快速灌注法神经组织染色试剂盒
mClavGR2 大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA Kit
人鸟苷酸解离抑制因子(GDI)ELISA Kit Cyanobacteria medium bg11 -
SV40-MES-13细胞胞嘧啶 英文: Cytosine CAS号: 71-30-7
胞苷 英文: Cytidine CAS号: 65-46-3
5′- 胞苷单磷酸 英文: 5′-CMP CAS号: 63-37-6
5-胞苷一磷酸二钠盐 英文: 5′-CMP,2Na CAS号: 6757-06-8
5-胞苷二磷酸单钠盐 英文: 5′-CDP,Na CAS号: 33818-15-4
5-胞苷二磷酸二钠盐 英文: 5′-CDP,2Na CAS号: 54394-90-0
5-胞苷三磷酸二钠盐 英文: 5′-CTP,2Na CAS号: 36051-68-0
5-胞苷三磷酸三钠盐 英文: 5′-CTP,3Na CAS号: 123334-07-6
5-胞苷三磷酸四钠盐溶液 英文: 5′-CTP,4Na CAS号:
胸腺嘧啶 英文: Thymine CAS号: 65-71-4
尿嘧啶 英文: Uracil CAS号: 66-22-8
操作流程:
1、您收到母细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,*后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)换用新鲜完全培养基继续培养。