操作流程:
1、您收到母细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,*后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)换用新鲜完全培养基继续培养。
服务流程:
(1)客户提供:目的细胞具体信息;
(2)操作过程:细胞复苏培养,细胞发货;
(3)交付内容:细胞系/细胞株,以及细胞使用说明书。
产品名称 |
大鼠结肠平滑肌细胞 |
规格 |
详见说明书 |
货号 |
BH-8010836 |
培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
实验要点及说明 :
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为玻璃**,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右),稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。
3. 静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。
5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。
6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制,
7. 因为细胞培养过程外因太多,所以我们的售后保障期为一周,超过一周的细胞我们会酌情处理,但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
p3×Flag-cmv-14(p3Flagcmv14)(60908-268)y 人钙调素(CAM)ELISA Kit
人脑啡肽(ENK)ELISA Kit TSB-glucose medium
MMQ细胞株 pEX1
PiggyBac Dual Promoter (PiggyBacDualPromoter)(60908-4197) 猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA Kit
赤藓红B二钠盐 动物细胞裂解液(A)
昆虫种属鉴定PCR Mix PT2-Venus(PT2Venus)(60908-6468)
vP-8(vP8) MOPS Buffer,1.0M,pH8.5
DsRed2 人P钙黏蛋白/胎盘钙黏蛋白(P-cad)ELISA Kit
人甲状腺抗体(TAb)ELISA Kit Flexistipes medium
大肠杆Tuner(DE3)plysS 种 pET-35b(+)(pET35b,pET35b(+)(60908-2803)y
pE-SUMO(pESUMO) (60908-2755) 小鼠抗中粒/中心体抗体(ACA)ELISA Kit
L-甲氨酸 即用型高保真PCR试剂盒(9 mL)
谷胱甘肽S转移酶 pRET.IL.PGK-TK
大鼠结肠平滑肌细胞阿莫西林克拉维酸系统适用性对照品 英文名称:Amoxicillin clavulanic acid system suitability control products 规格::30mg 保存::-20℃,避光
利福布汀 英文名称:Leigh Fob Dean 规格::100mg 保存::-20℃,避光
巴洛沙星 英文名称:Balofloxacin 规格::100mg 保存::-20℃,避光
环孢素系统适用性对照品 英文名称:Cyclosporine system suitability control products 规格::50mg 保存::-20℃,避光
反式头孢吡肟 英文名称:Trans cefepime 规格::100mg 保存::-20℃,避光
比阿培南 英文名称:Biapenem 规格::50mg 保存::-20℃,避光
克林霉素B 英文名称:Clindamycin B 规格::50mg 保存::-20℃,避光
1,3-萘二酚 英文名称:1,3- naphthalene two phenol 规格::50mg 保存::-20℃,避光
头孢西丁 英文名称:Cefoxitin 规格::100mg 保存::-20℃,避光
头孢尼西 英文名称:Cefonicid 规格::200mg 保存::-20℃,避光
磷霉素钠 英文名称:Fosfomycin sodium 规格::100mg 保存::-20℃,避光