人胚肾细胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro 上海博湖生物科技有限公司

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产品名称：人胚肾细胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro
产品型号：P-X11287
产品**：派瑞曼
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简单介绍：

人胚肾细胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro公司正在出售的产品：SNU-C1结肠癌细胞内质网核信号转导蛋白2抗体 CBS ELISA Kit 胱硫醚定量elisa kit 卵巢癌抗原抗体 SCC-15细胞

详情介绍：

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。

人胚肾细胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro

英文简称

规格

货号

HEK293-EGFP-PURO

1×106

P-X11287

产品详情：

细胞别称；HEK293-EGFP-PURO；人肾上皮细胞系-EGFP；人胚肾细胞株-绿色荧光蛋白标记

种属来源；人

组织来源；胚胎肾

生长特性；贴壁生长

细胞代数；p3-p8

特别注意；该细胞贴壁不牢，运输过程中细胞会有脱落，如细胞脱落，请离心收集，消化后重新铺瓶

背景简介；Luciferase HEK-293细胞稳定表达萤光蛋白。该细胞株性状稳定，培养时不需要添加维持。可用作萤光蛋白活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带GFP基因。 HEK-293细胞是剪切过的人腺病毒5(Ad5)转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞，HEK-293细胞包含并表达转染的Ad5基因。早期报道中指出，293 HEK-293细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA，但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现，Ad5的1-4344位线性核苷酸整合入293 [HEK-293]细胞19号染色体(19q13.2)。293 [HEK-293]细胞为人类腺病毒载体扩的宿主，可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体，由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。

生物等级；2

细胞规格；1x106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

支原体检测；无

保藏机构；ATCC; CRL-1573 ATCC： PTA-4488 DSMZ： ACC-305 ECACC： 85120602

培养基；90% DMEM+10% FBS+PS+1. 0ug/ml puro

培养条件；气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件；无血清冻存液，液氮储存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜

。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

实验原理：

公司正在出售的产品：

骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa生化检测试剂盒

DNA Ladder 5000 60T

OT/BGP ELISA Kit

大量全血基因组DNA纯化试剂盒（20毫升全血）

人蛋白激酶C beta II(PKC-bII)elisa生化检测试剂盒

大鼠内脂素(visfatin)elisa检测试剂盒

PKC-bIIELISAKit

土壤几丁质酶测试盒

大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(BACE2)elisa检测试剂盒

LAMBDA噬菌体DNA氯化铯纯化试剂盒

小鼠抗心肌抗体(AMA)elisa分析检测试剂盒

水通道蛋白-2抗体 AQP2

乳酸脱氢酶工酶LDH-1测试盒 R1：40ml×1 抑制法

丝氨酸水解酶样蛋白2抗体 SERHL

植物胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量检测试剂盒

PELI3蛋白抗体 PELI3

活化转录因子6β抗体 ATF6 beta

PE标记人FOXP3单克隆抗体 human FOXP3/PE

新的饱食分子蛋白抗体 Nucleobindin 2

组织相容性抗原DQA1重组兔单克隆抗体 HLA-DQA1

嗅觉受体5H2抗体 OR5H2

1号染色体开放阅读框113抗体 C1orf113

大脑边缘系统相关膜蛋白抗体 LSAMP

环腺苷酸应答元件结合蛋白转录共激活因子TORC1抗体 CRTC1

蛋白激酶锚定蛋白样蛋白2抗体 NBEAL2

FAM96B蛋白抗体 FAM96B

EXOSC8蛋白抗体 EXOSC8

人胚肾细胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro磷酸化细胞周期检测点激酶1抗体 phospho-CHEK1 (Ser286)

磷脂转移蛋白抗体 PLTP

大鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)elisa检测试剂盒

小鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员11A(TNFRSF11A/RANK)elisa检测试剂盒

组织样品组织G（CATHEPSIN G）活性比色法定量检测试剂盒

实验步骤：

1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。

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骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa生化检测试剂盒	DNA Ladder 5000 60T
OT/BGP ELISA Kit	大量全血基因组DNA纯化试剂盒（20毫升全血）
人蛋白激酶C beta II(PKC-bII)elisa生化检测试剂盒	大鼠内脂素(visfatin)elisa检测试剂盒
PKC-bIIELISAKit	土壤几丁质酶测试盒
大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(BACE2)elisa检测试剂盒	LAMBDA噬菌体DNA氯化铯纯化试剂盒
小鼠抗心肌抗体(AMA)elisa分析检测试剂盒	水通道蛋白-2抗体 AQP2
乳酸脱氢酶工酶LDH-1测试盒 R1：40ml×1 抑制法	丝氨酸水解酶样蛋白2抗体 SERHL
植物胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量检测试剂盒	PELI3蛋白抗体 PELI3
活化转录因子6β抗体 ATF6 beta	PE标记人FOXP3单克隆抗体 human FOXP3/PE
新的饱食分子蛋白抗体 Nucleobindin 2	组织相容性抗原DQA1重组兔单克隆抗体 HLA-DQA1
嗅觉受体5H2抗体 OR5H2	1号染色体开放阅读框113抗体 C1orf113
大脑边缘系统相关膜蛋白抗体 LSAMP	环腺苷酸应答元件结合蛋白转录共激活因子TORC1抗体 CRTC1
蛋白激酶锚定蛋白样蛋白2抗体 NBEAL2	FAM96B蛋白抗体 FAM96B
EXOSC8蛋白抗体 EXOSC8	人胚肾细胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro磷酸化细胞周期检测点激酶1抗体 phospho-CHEK1 (Ser286)
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小鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员11A(TNFRSF11A/RANK)elisa检测试剂盒	组织样品组织G（CATHEPSIN G）活性比色法定量检测试剂盒

产品名称：人胚肾细胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro