产品名称：人结肠癌细胞带荧光素酶；SW480/LUC

干冰运输及复苏好存活细胞

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

人结肠癌细胞带荧光素酶；SW480/LUC

英文名称	SW480/LUC	产品形态	上皮细胞样 贴壁生长
货号	P-X10685	产品分类	人
规格	1×106	包装	株
来源	结肠	用途	仅供科研研究使用

细胞特性：

细胞别称；Sw480-LUC；人结肠癌细胞株-LUC;人结肠腺癌细胞-荧光素酶标记

种属来源；人

组织来源；结肠

生长特性；贴壁生长

细胞形态；上皮细胞样

细胞代数；p3-p8

特别注意；SW480-LUC细胞培养不能通入CO2，如果没有条件准备空气气相100%的培养箱，可以采用不透气密封盖的T25培养瓶来培养，培养过程中每天将细胞拿出培养箱换1-2次空气

背景介绍；Luciferase SW480细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。该细胞株性状稳定，培养时不需要添加维持。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。SW480细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。SW480源自原位直肠腺癌，和SW620细胞源自同一病人一年后的结转移。CSAp和直肠抗体3阴性角蛋白过氧化物酶染色阳性。p53基因第273位密码子的G&rarrA突变引起Arg&rarrHis替代，309位密码子的C&rarrT突变导致Pro&rarrSer替代。细胞p53蛋白表达水平，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表达呈阳性，癌基因N-myc的表达未做检测。SW480 [SW-480]细胞不表达细胞溶解酶，一种与肿瘤入侵相关的金属蛋白酶。有报道称，SW480 [SW-480]细胞表达GM-CSF。SW480 [SW-480]细胞ras原癌基因的12位密码子有一个突变，可以用作PCR法检测该突变的阳性对照。1978年11月，A&middotLeibovitz将其提交给ATCC时已传代至第91代。

生物等级；1

细胞规格；1x106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

支原体检测；无

保藏机构；ATCC; CCL-228 DSMZ; ACC-313 ECACC; 87092801

培养基；90%L-15+10% FBS+PS+1.0ug/ml puro

培养条件；气相：100%空气；温度：37℃

冻存条件；无血清冻存液，液氮储存

细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。                      
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备MEM（推荐iCell-0012）培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二、细胞培养操作:

1) 复苏细胞：将含有 1 mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 4 mL 培养基混 合均匀。在 1000 rpm 条件下离心 3 min，弃去上清液，加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有 细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜 (或将细胞悬液加入 6 cm 皿中，加入约 4 mL 培养基，培养过夜) 。天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去 消化液，将培养瓶置于 37℃培养箱中消化 1 -3min (视细胞消化情况而定) ，然后在显微镜下 观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。        。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞，装入无菌离心管中，1000 rpm 条件下离心 4 min，弃去上清液， 用 PBS 清洗一遍，弃尽 PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度 5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻 存管冻存 1mL 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h 后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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三、培养注意事项:

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。 
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。 
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。 
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。 
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。 
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 
7. 该细胞仅供科研使用。 
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 1：2 传代 。 
9. 注意：  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。