细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。
英文简称
规格
货号
B16:B16
1×106
P-X1031
产品详情：
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 成纤维细胞样
生长培养基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
注意事项 B16系列细胞，使用DMEM培养时可能出现黑色su快速积累，细胞不增殖或死亡的情况，该细胞正常扩增冻存请使用RPMI-1640完培，若您需要进行分泌黑色su等后续相关实验，可以在扩增冻存细胞后更换为DMEM培养来满足实验设计。
背景描述 B16细胞是一株小鼠黑su瘤细胞。
年龄（性别） 不详
组织来源 黑su瘤
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 黑色su瘤细胞
生物等级 1
保藏机构 JCRB; JCRB0202 KCB; KCB 93030YJ RCB; RCB1283 TKG; TKG 0144
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理：
公司正在出售的产品：
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鱼白介素1β(IL-1β)elisa分析检测试剂盒 |
羊胰岛素样生长因子II(IGF2)elisa分析检测试剂盒 |
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IL- 1β ELISA Kit |
P27蛋白表达西方杂交分析试剂盒 |
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人表皮细胞活化肽因子(CAPF)elisa分析检测试剂盒 |
Humanrhinovirus(RV)antibody(IgA)ELISAkit |
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CAPFELISAKit |
人鼻病毒(RV)抗体(IgA)elisa分析检测试剂盒 |
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鸡白介素6受体(IL-6R)elisa分析检测试剂盒 |
IGF2 ELISA kit |
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等电聚焦蛋白电泳（IEF）10倍祛色溶液 |
NOC2L |
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小鼠甘露糖结合凝集素(MBL)elisa检测试剂盒 |
9号染色体开放阅读框135抗体 |
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NOC2家族样蛋白抗体 |
C9orf135 |
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Cy3标记的小鼠抗豚鼠IgG H&L |
白细胞介素1受体衔接蛋白抗体 Anti-TIRAP |
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Mouse Anti-Guinea Pig IgG H&L / Cy3 |
6磷酸果糖激酶2抗体 Anti-PFK2/PFKFB3 |
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血清淀粉样蛋白4抗体 |
磷脂酰肌醇激酶PIK3-γ抗体 Anti-PIK3 gamma |
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Serum amyloid A 4 protein |
低密度脂蛋白受体相关蛋白9抗体 Anti-SorLA/LRP9 |
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人C肽(C-Peptide)elisa分析检测试剂盒 |
小鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)elisa分析检测试剂盒 |
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HumanC-PeptideELISAKit |
B16小鼠黑色素瘤细胞FⅩELISAKit |
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大鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(BACE2)elisa分析检测试剂盒 |
人黑色素瘤活性抑制蛋白(MIA)elisa分析检测试剂盒 |
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BACE2 ELISA Kit |
MIAELISAKit |
实验步骤：
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。
