细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代。
英文简称
规格
货号
T24:T24
1×106
P-X990
产品详情:
细胞别称:T-24; T 24;人膀胱移行细胞癌细胞
种属来源:人
年龄性别:女,81岁
组织来源:膀胱;移行细胞癌
生长特性:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
背景简介:T24细胞源自一位81岁白人女性患者的膀胱移行细胞癌组织;来源于移行细胞癌病人的白血病和血浆对T24和相关细胞株有细胞毒性;倍增时间:为19小时;含ras(H-ras)癌基因,表达肿瘤特有抗原。
生物等级:1
细胞规格:1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测:无
基因表达情况:tumor specific antigen, HLA A1, A3, B18, Bw35, Cw4, DRw2, Dw4
保藏机构:ATCC; HTB-4 DSMZ; ACC-376 ;中国典型培养物保藏中心细胞库
培养基:MCCOY'S 5A+10%FBS+PS
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件:无血清冻存液,液氮储存
倍增时间:~20-48 hours
STR鉴定位点Amelogenin:X;CSF1PO:10,12;D13S317:12;D16S539:9;D18S51:16,18;D19S433:13,14;D21S11:29;D2S1338:20,23;D3S1358:16;D5S818:10,12;D7S820:10,11;D8S1179:14;FGA:17,22;TH01:6;TPOX:8,11;vWA:17;
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏::将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理:
公司正在出售的产品:
猴血纤蛋白原降解产物(FDP)elisa分析检测试剂盒 |
磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶抗体 PEAMT |
FDP ELISA kit |
信号转导和转录激活因子6抗体 STAT6 |
人肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)elisa分析检测试剂盒 |
FBXL3蛋白抗体 FBXL3 |
MCTELISAKit |
FAM151B蛋白抗体 FAM151B |
血管活性肠肽抗体 VIP |
锚蛋白重复结构域蛋白40抗体 ANKRD40 |
胆固醇调节元件结合蛋白2抗体 SREBP2 |
胎球蛋白B/Fetuin β抗体 Fetuin beta |
蛋白磷酸酶3调节亚基R2抗体 PPP3R2 |
PE标记小鼠CD23单克隆抗体 mouse CD23/PE |
丝裂原活化蛋白激酶3K10抗体 MAP3K10 |
Rabbit Anti-Acetyl-Histone H3 (Lys18) antibody |
大鼠层连蛋白/板层素(LN)elisa分析检测试剂盒 |
1号染色体开放阅读框168抗体 C1orf168 |
小鼠可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)elisa分析检测试剂盒 |
26S蛋白酶调节亚型p55抗体 PSMD12 |
犬成纤维细胞生长因子23(FGF23)elisa分析检测试剂盒 |
肌动蛋白结合蛋白1B抗体 CORO1B |
组织乙醇脱氢酶总活性比色法定量检测试剂盒 |
甲基样蛋白16抗体 METT10D |
猪分泌型球蛋白A(sIgA)elisa检测试剂盒 |
燕麦β-葡聚糖含量荧光定量检测试剂盒 |
大鼠胸腺素β-4(TMSB4X)elisa检测试剂盒 |
T24人膀胱移行细胞癌细胞小鼠C肽(C-Peptide)elisa检测试剂盒 |
人存活素抗体/生存蛋白(Surv)elisa分析检测试剂盒 |
小鼠血清淀粉样蛋白A2(SAA2)elisa检测试剂盒 |
植物磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性荧光定量检测试剂盒 |
大鼠可溶性血纤蛋白单体复合物(SFMC)elisa检测试剂盒 |
实验步骤:
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上,利用293T细胞进行慢病毒包装,获得含目的基因的慢病毒;
2 转染前24 h进行细胞铺板,转染时细胞密度控制在80%左右;
3 天加入适量病毒悬液感染细胞,并置于37 ℃,5% CO2培养箱中孵育;
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基,并继续培养;
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养,直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%,获得稳转细胞系。