细胞接收后的处理:
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代。
英文简称
规格
货号
MDA-MB-415:MDAMB415
1×106
P-X843
产品详情:
生长特性
贴壁细胞
细胞形态
上皮细胞样
生长培养基 Leibovitz's L-15+10μg/ml Insulin+10μg/ml Glutathione+15% FBS+1% P/S
冻存条件
冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养条件
气相:空气,100%
温度:37℃
推荐传代比例 1:2-1:3
推荐换液频率 2~3次/周
注意事项 1、该细胞推荐使用Leibovitz's L-15培养基进行培养,Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳,会产生细胞毒性; 2、如您没有无二氧化碳的培养箱,可使用DMEM替代Leibovitz's L-15,使用DMEM培养基时即可正常通入5%二氧化碳; 3、配套专用培养基默认Leibovitz's L-15配置,如需DMEM配方,请联系销售下单备注更改。
背景描述 MDA-MB-415细胞源于一名38岁患有乳腺腺癌女性的胸腔积液,MDA-MB-415细胞表达WNT7B癌基因。MDA-MB-415细胞形成平展延伸的上皮细胞样,在电镜下呈现结节,伴随着延伸的微管和微板。MDA-MB-415细胞不容易用yi酶消化。
年龄(性别)
女性,38岁
组织来源
未知
细胞类型
肿瘤细胞
肿瘤类型
乳腺癌细胞
生物等级 1
致瘤性 No, in immunosuppressed mice.Yes, in semisolid medium.
抗原表达情况 Blood Type O
基因表达情况 amelogenin (X chromosome)(AMELEX)
保藏机构 ATCC; HTB-128
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏::将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理:
公司正在出售的产品:
大象睾酮(T)elisa分析检测试剂盒 |
主导控制样蛋白1抗体 |
Elephant Testosterone(T)ELISA kit |
磷酸化核基质结合区结合蛋白1抗体 Anti-Phospho-SATB1 (Ser47) |
人大肠癌专一抗原4(CCSA-4)elisa分析检测试剂盒 |
C17orf53 |
CCSA-4ELISAkit |
17号染色体开放阅读框53抗体 |
环指蛋白31抗体 Anti-RNF31/HOIP |
MAML1 |
鼻咽癌相关蛋白6抗体 Anti-CCDC136/NAG6 |
TCN2 |
磷酸化WEE1蛋白抗体 Anti-Phospho-Wee1(Ser53) |
β连环蛋白样蛋白1抗体 |
转钴胺素蛋白2抗体 |
CTNNBL1 |
PE标记牛IgG |
角质蛋白β抗体 Anti-SPRR3/Cornifin B |
Bovine IgG / PE |
蛋白酪氨酸磷酸酶CD148抗体 Anti-PTP/PTPase/CD148 |
GRAMD4蛋白抗体 |
磷酸化3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1 Anti-Phospho-PDK1(Ser241) |
GRAMD4 |
胸腺细胞核蛋白1抗体 Anti-THYN1 |
大鼠甲状腺球蛋白IgG抗体elisa分析检测试剂盒 |
小鼠Apelin 13(AP13)elisa分析检测试剂盒 |
Rat Thyroglobulin IgG antibody ELISA Kit |
MDA-MB-415人乳腺癌细胞AP13ELISAKit |
组织胺N-甲基转移酶抗体 |
高尔基复合体相关蛋白1抗体 |
HNMT |
ACBD3 |
实验步骤:
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上,利用293T细胞进行慢病毒包装,获得含目的基因的慢病毒;
2 转染前24 h进行细胞铺板,转染时细胞密度控制在80%左右;
3 天加入适量病毒悬液感染细胞,并置于37 ℃,5% CO2培养箱中孵育;
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基,并继续培养;
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养,直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%,获得稳转细胞系。