细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。
英文简称
规格
货号
LNCaP clone FGC:LNCaP clone FGC
1×106
P-X822
产品详情：
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
生长培养基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
注意事项 1）该细胞并不形成一致的单层，而是形成集落。（2）该细胞会使培养基快速变酸，且生长缓慢，故传代后 48 小时内不应扰动；（3）普通TC处理的培养瓶或皿不能使细胞很好的贴壁，培养难度较高，需使用 Corning 的 cellbind 细胞培养瓶，或者使用多聚-L-赖氨酸溶液包被过的培养皿； （4）在细胞运输途中，多数细胞会从培养瓶底分离，大片悬浮在培养基中，按照收货注意事项处理即可恢复正常。
背景描述 人前列腺癌细胞LNCaP clone FGC是从一位50岁白人男性(血型B+)的左锁骨结针刺活检中分离，该患者经确诊为前列腺癌转移。LNCaP clone FGC细胞对5-α-二氢睾酮(生长调节子和酸性磷酸脂酶产物)有响应。LNCaP clone FGC细胞并不形成一致的单层，而是形成集落，在传代时可以用滴管反复吹吸打碎。LNCaP clone FGC细胞仅仅轻轻地吸附在基底上，不形成汇合，很快使培养基变酸。LNCaP clone FGC细胞生长极其缓慢，传代后48小时内不应扰动。当培养瓶封包后，多数LNCaP clone FGC细胞从培养瓶底分离，悬浮在培养基中。收到后，在通常培养单层细胞的条件下培养24-48小时，以使细胞再贴壁。此后，可以换上新鲜培养液。如果需要，培养瓶内容物可以收集，300g离心15分钟，以10毫升培养液重悬并培养到一个单独的培养瓶中。
年龄（性别） 男；50岁
组织来源 前列腺；左锁骨结癌转移灶
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 前列腺癌细胞
生物等级 1
倍增时间 ~32-36 hours
致瘤性 Yes, in soft agar.Yes, the cells are tumorigenic in nude mice.
受体表达情况 androgen receptor, positive;estrogen receptor, positive
基因表达情况 human prostatic acid phosphatase; prostate specific antigen
保藏机构 ATCC; CRL-1740 BCRC; 60088 BCRJ; 0149 ECACC; 89110211
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理：
公司正在出售的产品：
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角蛋白相关蛋白KAP22.1抗体 |
角蛋白相关蛋白KAP8.1抗体 |
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KAP22.1 |
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)elisa分析检测试剂盒 |
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卷曲螺旋结构域蛋白129抗体 |
CCDC153 |
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CCDC129 |
卷曲螺旋结构域蛋白153抗体 |
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细胞培养污染性支原体A.laidlawii鉴定16S rDNA |
KAP8.1 |
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氨基环丙烷羧酸含量测试盒 |
RHOBTB1 |
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碘成分比色法定量检测试剂盒 |
KIAA1644蛋白抗体 |
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Rho相关结构域BTB蛋白质1抗体 |
KIAA1644 |
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Cy5标记的羊抗豚鼠IgG H&L |
氏菌鞭毛抗原H抗体 Anti-Salmonella enteritidis H |
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Goat Anti-Guinea Pig IgG H&L / Cy5 |
原钙粘附蛋白18抗体 Anti-PCDH18 |
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G氨基丁酸A型受体rho3 /GABAA Rρ2/GABAc Rρ3抗体 |
蛋白质磷酸酶1B抗体（PP2Cβ） Anti-PPM1B |
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GABRR3 |
尿酸盐重吸收转运子1抗体 Anti-URAT1/SLC22A11 |
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绵羊基质金属蛋白酶1(MMP1)elisa分析检测试剂盒 |
小鼠多巴胺D1受体(D1R)elisa分析检测试剂盒 |
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Sheep matrix metallopeptidase 1(interstitial collagenase)(MMP1)ELISA kit |
LNCaP clone FGC人前列腺癌细胞D1RELISAKit |
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类人猿降钙素(CT)elisa分析检测试剂盒 |
人蛋白精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)elisa分析检测试剂盒 |
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CT ELISA Kit |
HumanPRMT1ELISAKit |
实验步骤：
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。
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