操作流程：
1、您收到母细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，*后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）换用新鲜完全培养基继续培养。
服务流程：
（1）客户提供：目的细胞具体信息；
（2）操作过程：细胞复苏培养，细胞发货；
（3）交付内容：细胞系/细胞株，以及细胞使用说明书。
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产品名称 |
结直肠癌氟尿嘧啶耐药株 |
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规格 |
详见说明书 |
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货号 |
BH-0111554 |
英文简称：HCT15/Fu细胞
产品名称：结直肠癌氟尿嘧啶耐药株
规格：
传代方法：
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
实验要点及说明 ：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为玻璃**，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。
3. 静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。
5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。
6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制，
7. 因为细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
25mL Laemmli’s (SDS-Sample) Buffer (non-reducing,6X) Laemmli’s (SDS-Sample) Buffer (non-reducing,6X) 常温保存 CD27 抗體, 兔單抗 FCM 50 µg
25mL Laemmli’s (SDS-Sample) Buffer (reducing,4X) Laemmli’s (SDS-Sample) Buffer (reducing,4X) 常温保存 TRIM28 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IHC-P IP 50 µg
25mL Laemmli’s (SDS-Sample) Buffer (reducing,6X) Laemmli’s (SDS-Sample) Buffer (reducing,6X) 常温保存 Nac1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P 50 µg
25mL Laemmli’s Buffer with Pyronin Y (non reducing,4X) Laemmli’s Buffer with Pyronin Y (non reducing,4X) 常温保存 Piwil2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P IF ICC/IF 50 µg
25mL Laemmli’s Buffer with Pyronin Y (reducing,4X) Laemmli’s Buffer with Pyronin Y (reducing,4X) 常温保存 BLyS / TNFSF13B / BAFF 抗體, 兔單抗 WB FCM IP 50 µg
25mL LDS-Sample Buffer (non-reducing,4X) LDS-Sample Buffer (non-reducing,4X) 常温保存 BLyS / TNFSF13B 抗體, 兔單抗 ELISA 50 µg
25mL LDS-Sample Buffer (reducing,4X) LDS-Sample Buffer (reducing,4X) 常温保存 Endoglin / CD105 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IF ICC/IF 50 µg
5mg Leucine Solution（亮氨酸溶液）,0.3% Leucine Solution,0.3% 常温保存 CD157 / BST1 抗體, 鼠單抗 ELISA 50 µg
50mL Lithium Chloride Solution（氯化锂溶液）,1M Lithium Chloride Solution,1M 常温保存 KRT8 / Cytokeratin8 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IHC-P IF IP ICC/IF 50 µg
100mL Lithium Chloride Solution（氯化锂溶液）,200mM Lithium Chloride Solution,200mM 常温保存 CD157 / BST1 抗體, 兔多抗 ELISA 400 µg
500mL Locke’s Solution Locke’s Solution 常温保存 CD157 / BST1 抗體, 兔單抗 ELISA 50 µg
125mL Luminol and Oxidizing Solutions Luminol and Oxidizing Solutions 常温保存 MAPT / PHF-tau 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA 50 µg
500mL Lysis Buffer Lysis Buffer 常温保存 Integrin beta 1 / ITGB1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IHC-P IF IP ICC/IF 50 µg
结直肠癌氟尿嘧啶耐药株CA IX 碳酸酐酶9抗体规格: 0.1ml
CAS/CSE1 凋亡敏感性基因抗体规格: 0.1ml
Phospho-Cas (Tyr165) 磷酸化 凋亡敏感性基因规格: 0.1ml
Caspase-1(actived P10) 天冬氨酸-胱氨酸特异性蛋白酶家族抗体规格: 0.1ml
Caspase 2 半胱胺酸蛋白酶-2抗体规格: 0.1ml
Caspase-10 半胱胺酸蛋白酶-10抗体规格: 0.1ml
Caspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗体规格: 0.1ml
Caspase-12 半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗体规格: 0.1ml
Caspase-13/4 半胱胺酸蛋白酶蛋白-13抗体规格: 0.2ml
Caspase-3(Active) 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗体规格: 0.1ml
caspase-3 p12 subunit 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗体规格: 0.1ml
caspase-3 p11 半胱天冬酶-3酶原抗体规格: 0.1ml
Caspase 4 半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗体规格: 0.1ml
