细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代。
英文简称
规格
货号
COLO320 DM :COLO320 DM
1×106
P-X692
产品详情:
细胞别称: COLO-320DM; COLO_320DM; COLO-320-DM; COLO320/DM; COLO320-DM; COLO320DM; Colo320DM; COLO320 DM; COLO 320 DM;人结直肠腺癌细胞
种属来源: 人
年龄性别: 女;55岁
组织来源: 器官:结肠;肿瘤分期:Dukes氏C型;:结直肠腺癌
生长特性: 半贴壁半悬浮生长
细胞形态: 圆形的并能折光的
背景简介: COLO 320DM细胞可产生5-羟色胺、去甲肾上腺素、肾上腺素、ACTH和甲状旁腺素。COLO 320DM细胞角蛋白、波形蛋白弱阳性。
生物等级: 1
细胞规格: 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测: 无
基因表达情况 serotonin; norepinephrine; epinephrine; adrenocorticotropic hormone (ACTH); parathyroid hormone
保藏机构 ATCC; CCL-220 BCRC; 60108 ECACC; 87061205;中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心
培养基: RPMI-1640+10% FBS+1%PS
培养条件: 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件: 无血清冻存液,液氮储存
STR鉴定位点 Amelogenin:X;CSF1PO:11;D13S317:11;D16S539:11,12;D18S51:15;D19S433:16.2;D21S11:33.2;D2S1338:18,25;D3S1358:17;D5S818:12;D7S820:9,12;D8S1179:13;FGA:20;TH01:9;TPOX:8,9;vWA:15,18;
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏::将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理:
公司正在出售的产品:
IWS1蛋白抗体 |
补体C3b抗体 Complement C3 beta chain |
IWS1 |
磷酸化肌球蛋白轻链多肽4抗体 phospho-MYL12B (Ser20) |
载脂蛋白A1结合蛋白抗体抗体 |
锌指蛋白257抗体 ZNF257 |
APOA1BP/AI-BP |
小鼠抗人CD273 (B7-DC, PD-L2)单克隆抗体 human CD273 (B7-DC, PD-L2) |
磷酸化肾上腺素能受体β2抗体 phospho-ADRB2 (Ser346) |
成纤维细胞生长因子受体2重组兔单克隆抗体 FGFR2 |
CRISPR/Cas9单克隆抗体 Cas9 |
环磷酸鸟苷抗体 cGMP |
DNAJC18蛋白抗体 DNAJC18 |
转录因子AP2α+β抗体 AP2 alpha + beta |
核因子1B抗体 NFIB |
转运蛋白SEC62抗体 SEC62 |
大鼠不对称二甲基精氨酸(ADMA)elisa分析检测试剂盒 |
神经突触相关蛋白SLITRK4抗体 SLITRK4 |
小鼠抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)elisa检测试剂盒免费代测 |
生物素标记的单体樱桃红荧光蛋白标签抗体 mCherry, Biotin conjugated |
植物类黄酮测试盒 |
NFKB激活蛋白1抗体 MAP3K7IP3 |
/酵母胱硫醚-β-裂解酶(cystathionine β-lyase;CBL)活性比色法定量检测试剂盒 |
PECI蛋白抗体 PECI |
猪S100B蛋白(S-100B)elisa检测试剂盒 |
组织砷元素比色法定量检测试剂盒 |
大鼠纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)elisa检测试剂盒 |
COLO320 DM 人结直肠腺癌细胞小鼠B-细胞趋化因子1(BLC1)elisa检测试剂盒 |
人脆性组氨酸三联体(FHIT)elisa分析检测试剂盒 |
小鼠心肌肌钙蛋白I(TNNI3)elisa检测试剂盒 |
细胞游离酶连续循环比色法定量检测试剂盒 |
大鼠抗人生长抗体(IgG)elisa分析检测试剂盒 |
实验步骤:
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上,利用293T细胞进行慢病毒包装,获得含目的基因的慢病毒;
2 转染前24 h进行细胞铺板,转染时细胞密度控制在80%左右;
3 天加入适量病毒悬液感染细胞,并置于37 ℃,5% CO2培养箱中孵育;
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基,并继续培养;
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养,直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%,获得稳转细胞系。