细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代。
英文简称
规格
货号
BEWO:BEWO
1×106
P-X665
产品详情:
细胞别称:人胎盘绒膜癌细胞;BeWo
种属来源:人
年龄性别:胚胎
组织来源:胎盘
生长特性:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
背景简介:BeWo细胞取自人绒癌脑转移组织,在仓鼠颊囊移植传代8年。利用移植瘤组织进行体外培养,建立细胞系。利用不同传代方法建立了不同亚系,JEG-3是其衍生克隆。Bewo细胞可以产生雌、孕、雌酮、雌二醇、雌三醇、hCG、胎盘催乳素、角蛋白等。
生物等级:1
细胞规格:1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测:无
基因表达情况:
保藏机构:ATCC; CCL-98 DSMZ; ACC-458 ECACC; 86082803;中国典型培养物保藏中心细胞库
培养基:F-12K+10%FBS+PS
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件:无血清冻存液,液氮储存
倍增时间:~30 hours
STR鉴定位点Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11,12;D13S317:9,11;D16S539:13,14;D18S51:14,16;D19S433:13,15;D21S11:30;D2S1338:21,24;D3S1358:15;D5S818:10,11;D7S820:10,12;D8S1179:12;FGA:22,23,24;TH01:9,9.3;TPOX:8;vWA:16;
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏::将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理:
公司正在出售的产品:
氧化低密度脂蛋白抗体 ox-LDL |
γ-谷氨酰转移酶轻链2抗体 GGTLC2 |
乙基丙二酸脑病蛋白抗体 ETHE1 |
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体β抗体 IL3RB |
动力蛋白轻链 DYNLT1 |
细胞周期检测点激酶2单克隆抗体 CHEK2 |
二胺乙酰基转移酶1抗体 SAT1 |
细胞色素P450 2J3抗体 Cyp2J3 |
磷酸化DNA修复酶Ku70抗体 phospho-Ku70 / XRCC6 (Ser5) |
白介素20受体α链抗体 IL-20R alpha |
APXL蛋白抗体 APXL |
骨折骨痂蛋白1抗体 FXC1 |
Bcl-2重组兔单克隆抗体 Bcl-2 |
脂肪酸结合蛋白12抗体 FABP12 |
宫颈癌抑制蛋白4抗体 ZAK |
肿瘤蛋白P73抗体 P73 |
大鼠CD34分子(CD34)elisa检测试剂盒 |
人乙肝病毒pre S1蛋白抗体 Hepatitis B Virus Surface Antigen |
小鼠防御素α5(DEFα5)elisa检测试剂盒 |
溶质载体家族蛋白9成员3调节因子2抗体 SLC9A3R2 |
鸡13,14二氢15-酮前列腺素F2α(PGFM)elisa分析检测试剂盒 |
KIAA0556蛋白抗体 KIAA0556 |
酵母腺苷脱氨酶(ADA)定量检测试剂盒 |
MEGF11蛋白抗体 MEGF11 |
小鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)elisa检测试剂盒 |
DOPAC高效液相色谱电化学定量检测试剂盒 |
大鼠酶原颗粒膜糖蛋白(GP2)elisa检测试剂盒 |
BEWO人胎盘绒毛膜癌细胞土壤α-葡萄糖苷酶(S-α - GC)测试盒 |
人N1,N12-二乙酰基精胺 elisa分析检测试剂盒 |
小鼠锚定蛋白重复域蛋白1(ANKRD1)elisa检测试剂盒 |
组织样品组织K(CATHEPSIN K)活性荧光定量检测试剂盒 |
大鼠甘油三酯(TG)elisa检测试剂盒 |
实验步骤:
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上,利用293T细胞进行慢病毒包装,获得含目的基因的慢病毒;
2 转染前24 h进行细胞铺板,转染时细胞密度控制在80%左右;
3 天加入适量病毒悬液感染细胞,并置于37 ℃,5% CO2培养箱中孵育;
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基,并继续培养;
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养,直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%,获得稳转细胞系。