产品名称：AMPKα1 Ab-487Antibody

特点：

       1、优化设计的实验方案，1小时即可完成

       2、灵敏度高，操作便捷

       3、试剂盒提供检测果糖所需的全套试剂 

常见样本处理方法：

1、血清（浆）样品：直接检测。

2、细胞或组织样品的制备：培养细胞：先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量

（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议 500万细胞加入 1mL提取液） ，超声波破碎细胞（冰浴，功率20％或200W，超声 3s，间隔10s，重复30 次）8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g） ：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，

加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

实验通用规则:

1、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

2、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。

3、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

4、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

5、实验时，要使底物避光保存。

6、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

7、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。

8、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

9、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。

10、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

试剂使用须知：

（1）请参照相关法规、文献、MSDS等信息，理解并掌握好试剂的特性，再进行**操作。

（2）通常购买试剂时一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话，更加注意其他保管和管理。

（3）万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。对于使用后的废弃物，不要或者旧的试剂，应按照相关法律法规正当处理。

（4）购买后，请务必确认标签上的注意事项；做好预防颠倒，摔坏的措施和管理体制；在使用前再次确认标签上的注意事项，做好必要的**对策；对没有标明其危害特性、有害特性的，也要慎重地进行操作；必须带好防护用具，小心翼翼进行操作。

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操作流程：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不浓度的标准品50μL；

3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。