优点如下:
1、快速简便:操作时间短,48-50T,可测40例样本左右,96-100T,可测80例样本左右;
2、取样量微:常规操作取样量50l, 酶标仪操作仅需5l即可检测,部分试剂盒取样多少请;
3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效;
4、再现性好:20倍稀释线性仍然良好;
5、回收试验: X =99%;
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强;
7、测试面广:可测动物血清(浆)、组织、各种体液、灌流液、各种培养细胞以及细胞培养上清液等,部分试剂盒适用于检测植物。
需自备的仪器和用品:
高效液相色谱仪、示差折光检测器、低速离心机、溶剂抽滤装置、超声波清洗器、针头式过滤器(水系,50个,0.22μm)、滤膜(水系1个,0.45μm)、
钙柱(Carbomix Ca-NP10,7.8 ×300 mm)、可调式移液器、样品瓶(50个,2mL)、超纯水。
测定步骤:
1.加样
1. 除包被外都需45度加样
2.加样体积要准确
3.管底加样,不能加在管壁上
4.加样时不能产生气泡
2.温浴
1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。
2.各ELISA板不应叠在一起。
3.为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。
4.加入底物后,反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃,ELISA板可避光放在实验台上,以便 不时观察,待对照管显色适当时,即可终止酶反应。
3.洗涤
1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却 是决定实验成败的关键。
2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。
4.读板
1.阴性对照颜色极浅,在定性测定中一般 可采用目视比色。
2.如用酶标仪测定结果,准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。
优点如下:
1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。
2、取样量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可测红细胞中的SOD,只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD,0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。
3、灵敏度高:IC50=0.05g/ml,是邻苯三酚法的18倍。
4、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
5、再现性好:变异系数CV=1.7%。
6、回收试验: X =103.3%。
7、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
8、测试面广:可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等,效果均佳。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。
溴氯甲烷 Bromochloromethane,≥99.5% 74-97-5 100G
碘代异丙烷 2-Iodopropane,99% 75-30-9 100G
碘代仲丁烷 sec-Butyl iodide,99% 513-48-4 25G
蒎烷 Pinane, endo + exo,≥98.0% 473-55-2 25G
1,3-二氯丙烷 1,3-Dichloropropane,99% 142-28-9 5ML
氯代正丙烷 1-Chloropropane,≥99.5% 540-54-5 5ML
六甲基二硅胺烷(HMDS) Hexamethyl disilylamine,≥99.0% 999-97-3 50ML
1-溴庚烷 1-Bromoheptane,99% 629-04-9 25G
氯代仲丁烷 2-Chlorobutane,≥99% 78-86-4 100ML
二十五烷 Pentacosane,99% 629-99-2 1G
溴代异戊烷 Isoamyl bromide,96% 107-82-4 100G
氯代正己烷 1-Chlorohexane,99% 544-10-5 100ML
氯代异丁烷 1-Chloro-2-methylpropane,≥98.0% 513-36-0 100ML
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无菌取样袋(带铁丝)(30cm*18cm) 50个/包*4
沙氏葡萄糖液体培养基(2015药典)(颗粒) 250g
100g DNA级HEPES(羟乙基乙硫磺酸)
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1mL 一步式RT-PCR Mix One-Step RT-PCR Mix -20℃保存
1瓶 Hed68 株 Hed68 低温运输和保存
2 ug pEYFP-Tub pEYFP-Tub 低温运输,-20℃保存
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