产品名称：50T小肠结肠炎耶尔森菌PCR检测试剂盒

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。

实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（*好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
ICOS配体(ICOSLG)ELISA试剂盒  ICOSLG ELISA Kit  磷酸化CREB-1抗体英文名称：phospho-CREB-1(Ser142) 0.1ml

ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA试剂盒  IRAP ELISA Kit  磷酸化CREB-1抗体英文名称：phospho-CREB-1(Ser121) 0.1ml

I 型胶原蛋白(COL I)ELISA试剂盒  COL I ELISA Kit  磷酸化周期素依赖性激酶6抗体英文名称：phospho-CDK6 (Tyr24) 0.1ml

H-钙粘着蛋白/H-钙粘连蛋白(H-Cad/CDH13)ELISA试剂盒  H-Cad/CDH13 ELISA Kit  原癌基因CBL2抗体英文名称：CBL2 0.2ml

G蛋白偶联受体152(GPR152/PGR5)ELISA试剂盒  GPR152/PGR5 ELISA Kit  磷酸化原癌基因CBL2抗体英文名称：phospho-CBL2 (Tyr674) 0.1ml

G蛋白偶联受体109A(GPR109A)ELISA试剂盒  GPR109A ELISA Kit  β链接素相互作用蛋白1抗体英文名称：CTNNBIP1 0.1ml

G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)ELISA试剂盒  GPBAR1 ELISA Kit  磷酸化β链接素相互作用蛋白1抗体英文名称：phospho-CTNNBIP1 (Thr43+Ser50) 0.1ml

G蛋白偶联雌受体1(GPR30)ELISA试剂盒  GPR30 ELISA Kit  磷酸化β 连环素蛋白抗体英文名称：phospho-Beta catenin (Tyr86)  0.1ml

G蛋白偶合受体44(GPR44/CRTH2/DL1R)ELISA试剂盒  GPR44/CRTH2/DL1R ELISA Kit  叶绿体蛋白酶抗体（植物）英文名称：Chloroplast protease 1ml

GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA试剂盒  GAP ELISA Kit  磷酸化后期促进复合蛋白3抗体英文名称：phospho-CDC27 (Ser427) 0.1ml

GTP酶NRas(NRAS)ELISA试剂盒  NRAS ELISA Kit  磷酸化丝切蛋白抗体英文名称：Phospho-Cofilin (Tyr140) 0.1ml

Gremlin-1蛋白(GREM1)ELISA试剂盒  GREM1 ELISA Kit  磷酸化丝切蛋白抗体英文名称：phospho-CFL1 (Tyr89) 0.1ml

GDP解离抑制因子2(GdI2)ELISA试剂盒  GdI2 ELISA Kit  磷酸化细胞周期检测点激酶2抗体英文名称：Phospho-CHK2 (ser33) 0.1ml

F-肌动蛋白(F-actin)ELISA试剂盒  F-actin ELISA Kit  磷酸化细胞分裂周期蛋白25抗体英文名称：Phospho-cdc25A (Ser293) 0.1ml

G1/S特异性细胞周期蛋白E1(CCNE1)ELISA试剂盒  CCNE1 ELISA Kit  磷酸化细胞分裂周期蛋白25抗体英文名称：Phospho-cdc25A (Ser178) 0.1ml

50T小肠结肠炎耶尔森菌PCR检测试剂盒50g 酪蛋白 Casein  室温

50g 脱脂奶粉（杂交专用） Nonfat Milk Powder 室温

50mL 即用型封堵液（NC专用）  Southern Blocking Buffer (NC) -20℃保存

50mL 即用型封堵液（Nylon专用） Southern Blocking Buffer (Nylon) -20℃保存

1张 硝酸纤维素膜，13×20 cm（Tiandz） Nitrocellulose Membrane 常温

1张 硝酸纤维素膜，13×20 cm（Amersham） Nitrocellulose Membrane 常温

1张 尼龙膜，13×20 cm Nylon Membrane 常温

5次 天净沙非同位素探针杂交试剂盒(适用常规DNA/RNA探针) Nonradioactive Probe Hybridization Kit 杂交液-20℃保存，其余成分常温

5次 天净沙非同位素探针杂交试剂盒（适用Oligo探针） Nonradioactive Probe Hybridization Kit 杂交液-20℃保存，其余成分常温

5次 BCIP-NBT法辛杂交检测试剂盒 BCIP-NBT DIG Detection Kit 10×封堵液和BCIP-NBT浓缩液需要-20℃保存，AP标记的抗DIG抗体需要4℃保存

5次 DAB法辛杂交试剂盒  

5次 TMB法辛杂交试剂盒  

5次 DAB法生物素杂交试剂盒  

注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。