产品名称：50T艰难梭状芽孢杆菌PCR检测试剂盒

注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化，灵敏性高。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物是根据高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。

实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（*好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
血浆炎性趋化因子(CXCL9/MIG)ELISA试剂盒  CXCL9/MIG ELISA Kit  猪瘟病毒抗体英文名称：CSFV 0.1ml

胸腺活化调节趋化因子(TAFA/CCL17)ELISA试剂盒  TAFA/CCL17 ELISA Kit  嗜铬粒蛋白C抗体英文名称：Chromogranin C/Sg II 0.2ml

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN/CD147)ELISA试剂盒  EMMPRIN/CD147 ELISA Kit  烟碱型乙酰胆碱受体α10/AChRα10抗体英文名称：CHRNA10 0.2ml

细胞凋亡因子配体(Fas-Ligand)ELISA试剂盒  Fas-Ligand ELISA Kit  烟碱型乙酰胆碱受体α6/AChRα6抗体英文名称：CHRNA6 0.2ml

糖蛋白130(gp130/CD130)ELISA试剂盒  gp130/CD130 ELISA Kit  烟碱型乙酰胆碱受体α9/AChRα9抗体英文名称：CHRNA9 0.2ml

胎球蛋白A(Fetuin-A)ELISA试剂盒  Fetuin-A ELISA Kit  烟碱型乙酰胆碱受体δ/AChRδ抗体英文名称：CHRND 0.2ml

胎球蛋白A(FetuinA)ELISA试剂盒  FetuinA ELISA Kit  凋亡加强结构域蛋白8抗体英文名称：CARD8 0.1ml

酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)ELISA试剂盒  FGF1 ELISA Kit  凋亡加强结构域蛋白7抗体英文名称：CARD7 0.1ml

酸性成纤维细胞生长因子(AFGF/FGF1)ELISA试剂盒  AFGF/FGF1 ELISA Kit  β衣被蛋白抗体英文名称：beta COP 0.2ml

瘦素受体(Leptin receptor)ELISA试剂盒  Leptin receptor ELISA Kit  半胱胺酸蛋白酶4/11抗体英文名称：Caspase 4+Caspase 11 0.1ml

瘦素(LEP/Leptin)ELISA试剂盒  LEP/Leptin ELISA Kit  1号染色体开放阅读框187抗体英文名称：C1orf187 0.2ml

噬酸性细胞趋化因子-2(Eotaxin-2)ELISA试剂盒  Eotaxin-2 ELISA Kit  9号染色体开放阅读框61抗体英文名称：C9orf61 0.2ml

噬酸性细胞趋化因子(Eotaxin)ELISA试剂盒  Eotaxin ELISA Kit  C末端结合蛋白2抗体英文名称：CTBP2 0.1ml

嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)ELISA试剂盒  Eotaxin 2/CCL24 ELISA Kit  冠蛋白3抗体英文名称：Coronin 3 0.2ml

嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)ELISA试剂盒  Eotaxin ELISA Kit  21号染色体开放阅读框13抗体英文名称：C21ORF13 0.2ml

50T艰难梭状芽孢杆菌PCR检测试剂盒20次 即用型蓝白T载体C型（T7-T3，无MCS） Instant Blue-White Vector T，Type C -20℃保存

20次 即用型蓝白T载体D型（无启动子，有MCS） Instant Blue-White Vector T，Type D -20℃保存

20次 即用型蓝白T载体E型（无启动子，无MCS） Instant Blue-White Vector T，Type E -20℃保存

50ng 可保种型蓝白T载体 Blue-White Vector T -20℃保存

20次 克必隆零背景T载体 Zero Background T Vector 低温保存

1ug PCR专用LIC克隆套装 LIC Cloning Kit for PCR -20℃保存

10ug M13mp 18  DNA（双链） M13mp18 DNA -20℃保存

10ug M13mp 18  DNA（单链） M13mp18 DNA -20℃保存

5ug lambda（λ） DNA（普通） Lambda DNA（λ DNA） -20℃保存

250ug lambda（λ） DNA（不含N6-甲基腺嘌呤） Lambda DNA（λ DNA） -20℃保存

250ug lambda（λ） DNA（非甲基化的cl857 Sam7） Lambda DNA（λ DNA） -20℃保存

30ug φX174 RFⅠDNA φX174 RFⅠDNA  -20℃避光保存

30ug φX174 RF Ⅱ DNA φX174RF Ⅱ DNA -20℃避光保存