服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 |
规格 |
货号 |
50T禽流感病毒H7N9亚型(AIV-H7N9)PCR检测试剂盒 |
50T |
BH-P64144 |
它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品RNA模板。
2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 特异性高,引物是根据高度保守区设计,不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
6. 本产品只能用于科研。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(*好用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
肥大细胞类胰蛋白酶β2英文名称:TPSB2 0.1ml
磷酸化酪氨酸激酶B抗体英文名称:phospho-TrkB (Tyr515) 0.1ml
细胞粘附分子1抗体英文名称:TSLC1 0.1ml
跨膜蛋白16A/钙激活氯离子通道抗体英文名称:TMEM16A 0.1ml
坏死因子-α抗体英文名称:TNF-alpha 0.1ml
蛋白P53诱导蛋白11抗体英文名称:TP53I11 0.2ml
味觉2型受体蛋白家族49抗体英文名称:TAS2R49 0.2ml
早期未分化视网膜及晶状体蛋白EURL抗体英文名称:TSPEAR 0.2ml
睾特异激酶底物蛋白抗体英文名称:TSKS 0.2ml
微管相关同源蛋白TPX2抗体英文名称:TPX2 0.2ml
神经细胞死亡诱导蛋白激酶抗体英文名称:TRIB3 0.1ml
微管蛋白β tubulin抗体 Tubulin β英文名称:tubulin Beta 0.1ml
转化酸性卷曲含蛋白质2英文名称:TACC2 0.2ml
脑源性tau蛋白激酶抗体英文名称:TTBK1 0.2ml
小鼠抗促甲状腺素抗体英文名称:TSHB 0.1ml
50T禽流感病毒H7N9亚型(AIV-H7N9)PCR检测试剂盒UVM1添加剂 UVM Supplement1 1ml*5支
FB2添加剂 FB2 Supplement 2ml*20支
MFB培养基 MFB Medium 250g
含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE) Trypticase Soy-Yeast Extract Broth 250g
含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE) Trypticase Soy-Yeast Extract Agar 250g
OXA添加剂 OXA Additive 1ml/支*5
LPM琼脂添加剂 LPM Agar Additive 1ml*5
FB1(Half-Fraser)添加剂 5ml*2
FB1(Half-Fraser)添加剂(A、B) FB1 additive(A、B) 2ml*40
血液琼脂基础 Blood agar base 250g
3%过氧化氢酶试剂 2ml*20支
SIM动力培养基 SIM power medium 250g
吖啶黄素(2.5mg/支) 1ml/支*5
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。