运输和保存:
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
英文名称
BCL2S87AJurkat:BCL2 (S87A Jurkat
产品形态
上皮细胞样 贴壁生长
货号
P-X10203
产品分类
人
规格
1×106
包装
株
来源
皮肤
用途
仅供科研研究使用
细胞特性:
种属来源: 人
年龄性别: 47 岁,女性
组织来源: 皮肤
生长特性: 贴壁生长
细胞形态: 上皮细胞样
细胞规格: 1 X 10 6cells/T25 或 1 mL 冻存管
培养条件: RPMI 1640+10% Foetal Bovine Serum37 ℃, 5% CO2
冻存条件: 90% FBS + 10% DMSO
传代方法:1:3 传代, 2-3 天传 1 代
细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备MEM(推荐iCell-0012)培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二、细胞培养操作:
1) 复苏细胞:将含有 1 mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 4 mL 培养基混 合均匀。在 1000 rpm 条件下离心 3 min,弃去上清液,加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有 细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜 (或将细胞悬液加入 6 cm 皿中,加入约 4 mL 培养基,培养过夜) 。天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。 a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去 消化液,将培养瓶置于 37℃培养箱中消化 1 -3min (视细胞消化情况而定) ,然后在显微镜下 观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
a、收集细胞,装入无菌离心管中,1000 rpm 条件下离心 4 min,弃去上清液, 用 PBS 清洗一遍,弃尽 PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度 5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻 存管冻存 1mL 细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h 后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的产品:
大鼠胰高血糖素样肽1(Glp-1)elisa检测试剂盒 |
WW结构域E3泛素连接酶1抗体 Anti-WWP1 |
TNF ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒 |
黑色素瘤相关抗原C3抗体 |
小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)elisa检测试剂盒 |
肌醇加氧酶抗体 |
caspase-2活性检测试剂盒分光光度法 20T、50T、100T |
TANC1 |
MAGEC3 |
TANC1蛋白抗体 |
脱氧胞苷激酶抗体 |
环指蛋白210抗体 Anti-RFPL4A/RNF210 |
DCK |
NDUFA9蛋白抗体 Anti-NDUFA9 |
PSD95结合蛋白4抗体 Anti-SAPAP4/DLGAP4 |
MIOX |
APC标记狗IgG |
肌蛋白结合蛋白γ2抗体 Anti-SNTG2/Syntrophin 5 |
Dog IgG / APC |
磷酸化磷脂酰肌醇激酶催化亚单位A抗体 Anti-phospho-PI3KCA(Tyr317) |
G蛋白偶联受体88抗体 |
磷脂酰肌醇激酶催化亚单位D抗体 Anti-PI3 Kinase p110 delta |
GPR88 |
睾丸特异丝氨酸/苏氨酸激酶6抗体 Anti-TSSK6/CT72 |
大鼠降钙素原(PCT)elisa生化检测试剂盒 |
小鼠cAMP反应元件结合蛋白(CREB)elisa生化检测试剂盒 |
PCT ELISA kit |
COLO 679人黑素瘤细胞CREBELISAKit |
组织相容性抗原H抗体 |
突触融合结合蛋白6抗体 |
HLA-H |
Amisyn |
三、培养注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞,再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,,用新鲜的完全培养基重悬 细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞 的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 1:2 传代 。
9. 注意: 1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。