细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。
英文简称
规格
货号
B16-F1
1×106
P-X9999
产品详情：
细胞别称：B16/F1; B16 F1; B16F1
种属来源：小鼠
年龄性别：不详
组织来源：皮肤
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
背景简介：B16-F1细胞是B16-F0细胞的亚系，源自黑色素瘤C57BL/6J荷瘤小鼠的皮肤；B16-F1细胞可产生黑色素。
生物等级：1
细胞规格：1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测：无
基因表达情况：
保藏机构：ATCC; CRL-6323 ECACC; 92101203
培养基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件：无血清冻存液，液氮储存
倍增时间：
STR鉴定位点18-3：15,16；6-7：15；5-5：16,20；X-1：28；1-2：19,20；7-1：26.2；8-1：16,17；1-1：17,18；19-2：13；15-3：22.3,23.3；12-1：17,18；6-4：18,19；4-2：20.3,21.3；3-2：14,15；2-1：16；13-1：17.1,18.1；11-2：16,17；17-2：15,16,17；
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理：
公司正在出售的产品：
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BCL2样12含脯氨酸蛋白抗体 BCL2L12 |
磷酸化活化复制因子2重组兔单克隆抗体 |
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CD20样蛋白1抗体 CD20L1/MS4A4A |
驱动蛋白结合蛋白1抗体 Anti-TRAK1 |
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酪氨酸磷酸酶受体相互作用蛋白Liprin α4抗体 PPFIA4 |
CCDC38 |
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磷酸二酯酶9A抗体 PDE9A |
卷曲螺旋结构域蛋白38抗体 |
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过氧化物酶体**蛋白5相关蛋白抗体 Anti-Peroxin 5R/PEX5-related protein |
phospho-ATF2 (Thr71) |
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蛋白质磷酸酶2A亚基3抗体 Anti-PPP2R3 |
Rabbit Anti-Mink IgG H&L / RBITC |
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S100P结合蛋白抗体 Anti-S100PBP/S100P binding protein |
eIF4GII蛋白抗体 |
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罗丹明标记的兔抗水貂IgG H&L |
eIF4GII |
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大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CTX-Ⅰ)elisa分析检测试剂盒 |
锌指蛋白300抗体 Anti-ZNF300 |
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CTX-Ⅰ ELISA Kit |
磷酸化细胞核因子/k基因结合核因子p100抗体 Anti-Phospho-NFKB2(Ser866+Ser870) |
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人富组蛋白(histatin-5)elisa分析检测试剂盒 |
Ras相关区域家族1A抗体 Anti-RASSF3 |
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Humanhistatin5ELISAKit |
分选连接蛋白5抗体 Anti-SNX5 |
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人丙二酸单酰辅酶A(malonyl CoA)elisa检测试剂盒免费代测 |
小鼠趋化因子C-X-C-基元配体16(CXCL16)elisa检测试剂盒 |
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组织CDK2/CYCLIN A激酶活性定量检测试剂盒（A/B/C） |
B16-F1 小鼠黑色素瘤细胞大鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)elisa检测试剂盒 |
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甲基样蛋白15抗体 |
1号染色体开放阅读框162抗体 |
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METTL15/METT5D1 |
C1orf162 |
实验步骤：
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。
