英文简称
规格
货号
bEnd.3:bEnd3
1×106
P-X1036
产品详情：
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养方案A（默认）
生长培养基:
DMEM＋10% FBS＋1% P/S
培养条件:
气相：空气，95%；CO2，5%, 温度：37℃
推荐传代比例 1:2-1:4
推荐换液频率 2-3次/周
注意事项 1.该细胞在低密度下形态不规则，细胞数量少，铺展面积大，高密度后形态会趋于一致，胞体密集；2.细胞增殖偏慢，初次传代建议1:2，细胞稳定后建议传代比例也不超过1:4；3.注意观察培养基颜色，颜色偏紫会导致细胞漂浮增加；4.消化时间会随着细胞生长时间和细胞密度而有所不同，需要结合消化时细胞状态来判断，消化到细胞可以滑落方可终止。
参考资料(来源文献)
背景描述 The cells were transformed by infection with the NTKmT retrovirus vector that expresses polyomavirus middle T antigen
年龄（性别） 6周龄
组织来源 大脑皮层
细胞类型 转化细胞系
生物等级 BSL-1
抗原表达情况 ICAM-1 +; VCAM-1 +; MAdCAM-1 +
基因表达情况 von Willebrand factor,ICAM-1 +; VCAM-1 +; MAdCAM-1 +,The endothelial nature of these cells was confirmed by the observed expression of von Willebrand factor and uptake of fluorescently labeled low density lipoprotein (LDL).,The expression of Peyer's Patch high endothelial receptor for lymphocytes, the mucosal vascular addressin (MAdCAM-1) and E-selectin can be induced on bEnd
保藏机构 ATCC; CRL-2299 BCRC; 60515 ECACC; 96091929
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理：
实验步骤：
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上，利用293T细胞进行慢病毒包装，获得含目的基因的慢病毒；
2 转染前24 h进行细胞铺板，转染时细胞密度控制在80%左右；
3 天加入适量病毒悬液感染细胞，并置于37 ℃，5% CO2培养箱中孵育；
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基，并继续培养；
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养，直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%，获得稳转细胞系。
公司正在出售的产品：
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NLRP8蛋白抗体 |
蝌蚪雌二醇(E2)elisa分析检测试剂盒 |
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NLRP8 |
通用型赖（lysine）含量荧光定量检测试剂盒 |
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HumanPGP9.5ELISAKit |
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GPROPDR |
人蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)elisa分析检测试剂盒 |
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小鼠胞外超氧化物歧化酶(SOD3)elisa检测试剂盒 |
E2 ELISA kit |
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貂环磷酸腺苷(cAMP)elisa检测试剂盒免费代测 |
MUTED |
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位素法DNA斑点杂交试剂盒 |
FAM47E蛋白抗体 |
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MUTED蛋白抗体 |
FAM47E |
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Cy5标记的兔抗小鼠IgG H&L-Fc |
TUB蛋白抗体 Anti-TUB 1 |
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Rabbit Anti-Mouse IgG Fc / Cy5 |
RAN GTPase酶激活蛋白1抗体 Anti-RanGAP1 |
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乙基丙二酸脑病蛋白抗体 |
磷酸化细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体 Anti-Phospho-NFKB1(Ser932) |
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ETHE1 |
Smad4抗体 Anti-Smad4 |
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人T细胞活化连接蛋白(LAT)elisa分析检测试剂盒 |
小鼠胃泌酸调节素elisa分析检测试剂盒 |
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HumanLATELISAKit |
bEnd.3小鼠脑微血管内皮细胞株MouseoxyntomodulinELISAKit |
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大鼠凋亡诱导因子(AIF)elisa分析检测试剂盒 |
山羊补体蛋白3(C3)elisa分析检测试剂盒 |
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AIF ELISA Kit |
C3ELISAKit |
