细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代。
英文简称
规格
货号
CaSKi:CaSKi
1×106
P-X684
产品详情:
细胞别称:Ca-Ski; CaSki; Caski; CASKI;人宫颈癌上皮细胞
种属来源:人
年龄性别:女;40岁
组织来源:;宫颈癌肠转移
生长特性:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
背景简介:Ca Ski细胞是从小肠肠系膜转移灶建立的。据报道,它含有完整的HPV-16(每个细胞大约600个拷贝)和HPV-18相关序列。可产生hCGβ亚单位、肿瘤相关抗原。
生物等级:2
细胞规格:1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测:无
基因表达情况:beta subunit of human chorionic gonadotropin (hCG); tumor associated antigen
保藏机构:ATCC; CRL-1550 ATCC; CRM-CRL-1550 ATCC; CRL-7915 BCRC; 60251 ECACC; 87020501;中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心
培养基:90% RPMI-1640+10% FBS+PS
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件:无血清冻存液,液氮储存
倍增时间:~60-80 hours
STR鉴定位点Amelogenin:X;CSF1PO:10;D13S317:8,12;D16S539:11,12;D18S51:17;D19S433:15,16;D21S11:30;D2S1338:21;D3S1358:15;D5S818:13;D7S820:8,11;D8S1179:15;FGA:21;TH01:7;TPOX:8;vWA:17;
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏::将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理:
公司正在出售的产品:
LYRM2蛋白抗体 |
胞质动力蛋白轻链中间体1抗体 DNCLI1 |
LYRM2 |
磷酸化蛋白激酶C亚型G抗体 Phospho-PKC gamma (Thr514) |
细胞角蛋白15重组兔单克隆抗体 |
心肌营养素1抗体 CT-1 |
Cytokeratin 15 |
线粒体乙酰化酶3抗体 [KO验证抗体] SIRT3 |
磷酸化紧密连接蛋白6抗体 phospho-Claudin 6 (Tyr219) |
补体因子H重组兔单克隆抗体 CFH |
CD44v7抗体 CD44v7 |
核转录因子YB抗体 NFYB |
CXXC型锌指蛋白4抗体 CXXC4 |
轴突生长诱向因子G1/神经突起生长导向因子G1抗体 Netrin-G1 |
核仁蛋白9抗体 NOL9 |
转录因子HES-1抗体 HES1 |
大鼠白介素2可溶性受体β链(sIL-2Rβ)elisa检测试剂盒 |
少突胶质细胞转录因子1抗体 OLIG1 |
小鼠降钙素(CT)elisa分析检测试剂盒 |
神经细胞蜡样质脂褐质沉积病蛋白CLN3抗体 CLN3 |
苹果酸含量测试盒 |
MTO1蛋白抗体 MTO1 |
酵母甘肽过氧化物酶(GSH PX)活性比色法定量检测试剂盒 |
O-唾液酸糖蛋白内肽酶抗体 OSGEP |
脂肪酶(LPS)测试盒 |
植物叶绿体总蛋白定量检测试剂盒 |
大鼠糖原磷酸化酶工酶II(GP-II)elisa检测试剂盒 |
CaSKi人宫颈癌细胞线粒体呼吸链复合物 Ⅴ 活性测试盒 20管/10样 生化法 |
人补体C1q(C1q)elisa检测试剂盒 |
小鼠糖皮质受体β(GR-β)elisa分析检测试剂盒 |
血液磷酸二酯酶(PDE)总活性荧光定量检测试剂盒 |
大鼠碱性磷酸酶(ALP)elisa检测试剂盒 |
实验步骤:
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上,利用293T细胞进行慢病毒包装,获得含目的基因的慢病毒;
2 转染前24 h进行细胞铺板,转染时细胞密度控制在80%左右;
3 天加入适量病毒悬液感染细胞,并置于37 ℃,5% CO2培养箱中孵育;
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基,并继续培养;
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养,直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%,获得稳转细胞系。