干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
英文名称
EA.hy926:EAhy926
产品形态
上皮细胞样 贴壁细胞
货号
P-X707
产品分类
人细胞系
规格
1×106
包装
株
来源
脐静脉/体细胞杂交
用途
仅供科研研究使用
细胞特性:
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
生长培养基 DMEM+10% FBS+1% P/S
冻存条件
冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养条件
气相:空气,95%;CO2,5%
温度:37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
背景描述 EA.hy926细胞是在PEG胁迫下,将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫niao嘌呤的A549克隆株融合,构建的一株人脐静脉细胞株。融合子在HAT培养基上生长,并以Ⅷ因子相关抗原筛选,EA.hy926细胞已经过100次以上的群体倍增(PDLs)。电镜照片显示,Weibel-Palade小体的细胞质分布以及组织特异性的细胞器,分化的内皮细胞特性如血管生成,体内平衡-血栓形成,血压及炎症反应。
组织来源 脐静脉/体细胞杂交
细胞类型 杂交瘤细胞
生物等级 1
倍增时间 ~12-24 hours
抗原表达情况 Factor VIII-related antigen; Homo sapiens, expressed
基因表达情况 Factor VIII-related antigen; Homo sapiens.
保藏机构 ATCC; CRL-2922
细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备MEM(推荐iCell-0012)培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二、细胞培养操作:
1) 复苏细胞:将含有 1 mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 4 mL 培养基混 合均匀。在 1000 rpm 条件下离心 3 min,弃去上清液,加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有 细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜 (或将细胞悬液加入 6 cm 皿中,加入约 4 mL 培养基,培养过夜) 。天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。 a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去 消化液,将培养瓶置于 37℃培养箱中消化 1 -3min (视细胞消化情况而定) ,然后在显微镜下 观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。 。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
a、收集细胞,装入无菌离心管中,1000 rpm 条件下离心 4 min,弃去上清液, 用 PBS 清洗一遍,弃尽 PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度 5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻 存管冻存 1mL 细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h 后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的产品:
胰岛素生长因子样家族成员1抗体 |
LOC83459蛋白抗体 |
IGFL1 |
痉挛性截瘫相关蛋白21抗体 Anti-SPG21 |
17号染色体开放阅读框104抗体 |
CYB561D1 |
C17orf104 |
细胞色素B561结构域蛋白1抗体 |
磷酸化Runx3抗体 Anti-phospho-RUNX3(Ser338) |
LOC83459 |
G蛋白偶联受体66/神经调节肽U受体1抗体 Anti-NMUR1/GPR66 |
SPAG11A |
锌指蛋白843抗体 Anti-ZNF843 |
14号染色体开放阅读框抗体 |
精子相关抗原11A抗体 |
MAPK1IP1L/C14orf32 |
FITC标记的小鼠IgM |
5-羟色胺受体3D抗体 Anti-5HT3D Receptor |
Mouse IgM / FITC |
原钙粘蛋白γC5抗体 Anti-PCDHGC5 |
G蛋白偶联受体8抗体 |
泛素连接酶抗体 Anti-PIRH2 |
GPCR GPR8 |
转移生长因子β受体1抗体(TGF-βRⅠ,TGFβRⅠ) Anti-TGF Beta R1/TGFBR1 |
大鼠抗血小板抗体(IgM)elisa分析检测试剂盒 |
小鼠S100-B蛋白(S100B)elisa分析检测试剂盒 |
Rat platelet antibody IgM ELISA kit |
EA.hy926人脐静脉细胞融合细胞S100BELISAkit |
鲨鱼三碘甲状腺原氨酸(T3)elisa分析检测试剂盒 |
人白介素37(IL-37)elisa分析检测试剂盒 |
T3 ELISA Kit |
HumanIL-37ELISAKit |
三、培养注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞,再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,,用新鲜的完全培养基重悬 细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞 的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 1:2 传代 。
9. 注意: 1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。