细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代。
英文简称
规格
货号
DLD-1:DLD1
1×106
P-X703
产品详情:
生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
冻存条件
冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养方案A(默认)
生长培养基:
RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
培养条件:
气相:空气,95%;CO2,5%, 温度:37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2-3次/周
参考资料(来源文献)
背景描述 DLD-1细胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分离的两株结直肠腺癌细胞株中的一株。在ATCC和其它地方进行的DNA指纹鉴定和染色体组型分析表明DLD-1细胞与HCT-15细胞相似,说明这两者是来自同一个人的不同克隆。DLD-1细胞和HCT-15细胞的遗传起源可通过DNA指纹鉴定证实,但染色体组型分析显示它们缺乏染色体标记一致改变或数目上一致改变。DLD-1细胞的CSAp阴性(CSAp-),p53抗原表达呈阳性(p53抗原产生了一个C→T点突变导致241位的Ser→Phe)。DLD-1细胞角蛋白过氧化物酶染色阳性,癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表达呈阳性,癌基因N-myc的表达未做检测。DLD-1细胞表达肿瘤特异性核基质蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1细胞代数不明且污染了支原体,其后经过12周多种联合培养处理,处理之后每周用Hoechst染色和标准培养法检测。其后连续11个月不加培养,DLD-1细胞所有的检测呈阴性。
年龄(性别) 男性
组织来源 结直肠腺癌上皮细胞
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 肠癌细胞
生物等级 BSL-1
倍增时间 ~24-48 hours
致瘤性 Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells).
抗原表达情况 Blood Type O.The cells are weakly positive for keratins and vimentin.The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.DLD-1 cells are positive for p53 antigen expression (the p53 antigen produced has a C -> T
基因表达情况 carcinoembryonic antigen (CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; colon antigen 3.
保藏机构 ATCC; CCL-221 BCRC; 60132 DSMZ; ACC-278 ECACC; 90102540
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1)冻存细胞的复苏::将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜
。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
实验原理:
公司正在出售的产品:
造血相互作用蛋白PBX抗体 PBXIP1 |
多种凝血因子缺乏蛋白2单克隆抗体 MCFD2 |
整合素αVβ6抗体 Integrin Alpha V + Beta 6 |
钠钙交换蛋白2抗体 NCX2 |
富含亮氨酸重复家庭蛋白2抗体 LRCH2 |
胰岛素样生长因子1抗体 IGF 1 |
钙粘蛋白29抗体 CDHR4 |
亚甲基四氢叶酸还原酶MTHFR抗体 MTHFR |
内皮细胞凝集素HL1抗体 ITLN1 |
泛素样蛋白Sumo2抗体 Sumo2 |
FITC标记人FOXP3单克隆抗体 human FOXP3/FITC |
紧密连接蛋白14抗体 Claudin 14 |
FSP-1抗体 S100A4 |
5-羟色胺受体1B抗体 5HT1B Receptor |
剪切及多聚腺苷酸化特异性因子6蛋白抗体 CPSF6 |
9号染色体开放阅读框153抗体 C9orf153 |
DHPR受体蛋白表达ELISA定量检测试剂盒 |
铁调节蛋白1抗体 Aconitase 1 |
细胞色素b5含量测试盒 |
突触融合蛋白1A/1B抗体 Syntaxin 1A + Syntaxin 1B |
1摩尔 TRIS pH7.5分子生物级溶液 |
RBMS2蛋白抗体 RBMS2 |
小鼠蛋白聚糖4(PRG4)elisa检测试剂盒 |
SMAD8蛋白抗体 SMAD8 |
人白介素-5(IL-5)elisa检测试剂盒 |
小鼠血小板/内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1/CD31)elisa检测试剂盒 |
/酵母磷脂酶D2(Phospholipase D2)活性比色法定量检测试剂盒 |
DLD-1人结直肠腺癌细胞大鼠可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)elisa检测试剂盒 |
大鼠E选择素(E-Sel)elisa检测试剂盒 |
犬表达于SiSo细胞系的受体结合型肿瘤抗原(EBAG9)elisa分析检测试剂盒 |
小鼠可溶性血栓调节蛋白(sTM)elisa检测试剂盒 |
组织醛缩酶(ADOLASE)活性比色法定量检测试剂盒 |
实验步骤:
1 将目的基因构建到合适的慢病毒载体上,利用293T细胞进行慢病毒包装,获得含目的基因的慢病毒;
2 转染前24 h进行细胞铺板,转染时细胞密度控制在80%左右;
3 天加入适量病毒悬液感染细胞,并置于37 ℃,5% CO2培养箱中孵育;
4 24 h后用新鲜培养基替换含有病毒的培养基,并继续培养;
5 在转染3-4天后开始加药筛选培养,直至显微镜下观察荧光细胞比例为100%,获得稳转细胞系。